PinX1抑制胃癌細胞增殖、增強其對5-FU敏感性及機制研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文PinX1抑制胃癌細胞增殖、增強其對5FU敏感性及機制研究姓名：王洪斌申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（消化系病）指導教師：房殿春20090501第三軍醫(yī)大學博士學位論文態(tài)特征的變化。5、通過MTT法觀察轉(zhuǎn)染前后細胞的增殖能力的變化，繪制細胞生長曲線。6通過MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌MKN28細胞對化療藥物5一FU的敏感性變化。7通過流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期的改變。8通過半定量RTPCR及westemBlot

2、ting檢測轉(zhuǎn)染前后各細胞系中Madl／c—Myc水平的改變。9、采用熒光素標記的端粒酶重復序列擴增法(TRAP)法檢測轉(zhuǎn)染前后各細胞系端粒酶活性的變化。結(jié)果：1經(jīng)酶切及測序證明，成功構(gòu)建重組PinXl真核表達載體及針對PinXl編碼區(qū)的的RNA干涉真核表達載體與陰性對照載體；2、檢測表明：高分化的Ml(N28細胞中無PinXl表達，低分化的BGC823細胞PinXl高表達，中分化的SGC7901細胞Pinxl中等表達；3成功地將構(gòu)建好

3、的重組真核表達載體及干涉載體通過脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染胃癌MKN28與BGC823細胞，經(jīng)G418抗性篩選獲得穩(wěn)定表達的細胞株；檢測表明，PinXl基因成功地轉(zhuǎn)染入MKN28細胞；有2條干擾序列對PinXl有干擾效果；4細胞形態(tài)特征：HE染色可見轉(zhuǎn)染PinXl基因的Ml(N28細胞為多邊形，但是大小不一更為明顯，大而扁平的細胞更為常見，巨細胞比例明顯增加，最大的細胞體積可以達到小細胞的5～lO倍，多核細胞常見；未轉(zhuǎn)染的MKN28細胞呈梭形、短梭

4、形，大小不一。透射電鏡特征：轉(zhuǎn)染PinXl基因的Ml(N28細胞內(nèi)可見凋亡小體，小體內(nèi)可見半月形異染色質(zhì)；而未轉(zhuǎn)染或僅轉(zhuǎn)染空載體的胃癌MKN28細胞內(nèi)可見細胞器減少，幼稚，線粒體呈桿狀，核漿比例增大，核仁突出；5MTT檢測表明：轉(zhuǎn)染PinXl基因的Ml(N28細胞較之未轉(zhuǎn)染或僅轉(zhuǎn)染空載體的胃癌MKN28細胞生長明顯減慢(PO05)：6MTT檢測表明：轉(zhuǎn)染Pinxl基因的MKN28細胞對5一FU的半數(shù)抑制濃度(IC50)值為O253O02

5、1mg／L，明顯低于未轉(zhuǎn)染或僅轉(zhuǎn)染空載體的胃癌MKN28細胞的IC50值(分別為0560O017及O590O026mg／L)(PO05)；7流式細胞儀檢測細胞周期和細胞凋亡表明：轉(zhuǎn)染Pinxl基因的MKN28細胞的Go／G1期細胞數(shù)(％)為8476392，明顯高于未轉(zhuǎn)染或僅轉(zhuǎn)染空載體的胃癌MKN28細胞的Go／Gl期細胞數(shù)(分別為6874696及65913OO)(PO05)；而轉(zhuǎn)染PinXl基因的Ml喇28細胞的增殖指數(shù)(％)為1524