低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對大鼠睪丸Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表達的影響.pdf

1、本實驗采用大鼠喂服棉酚和甾體激素聯(lián)合用藥方式[棉酚12.5mg/（kg·d）+去氧孕烯125μg/（kg·d）+炔雌醇25μg/（kg·d）+十一酸睪丸酮100mg/（kg·d）]，與單獨喂服相同劑量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纖維素溶劑的大鼠相對照，通過免疫組織化學染色和免疫印跡法，觀察Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表達的變化，進而了解低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合應用（棉甾聯(lián)合用藥）對大鼠睪丸Cdc25A、cyclin。B1及

2、AR蛋白表達的影響。
　　 Cdc25A免疫組織化學顯示，在從精原細胞轉變到前細線期精母細胞的過程中，Cdc25A的陽性部位出現在細胞核；進入粗線期精母細胞之后到雙線期精母細胞這一階段，Cdc25A的陽性定位在細胞質中；圓形精子細胞內的Cdc25A主要集中在頂體部位表達。用藥6周時，棉甾聯(lián)合用藥組Cdc25A在頂體和間質中的表達較對照組減弱，均有顯著性差異（P<0.05）；用藥8周和10周時，Cdc25A在同一時間點間質和頂體的

3、表達趨勢與用藥6周時相同。用藥8周時，棉甾聯(lián)合用藥組Cdc25A在精母細胞中表達較對照組增強。Western blotting結果顯示，棉甾聯(lián)合用藥組大鼠睪丸組織的總蛋白中Cdc25A的表達量呈上升趨勢，與對照組的變化趨勢相反。
　　 Cyclin B1免疫組化結果顯示其主要定位在大鼠睪丸組織的間質細胞和圓形精子細胞中。棉甾聯(lián)合用藥組中cyclin B1在間質細胞中的表達量明顯降低（P<0.05），但在圓形精子細胞中的表達量沒有

4、明顯改變。Western blotting結果顯示，棉甾聯(lián)合用藥組大鼠睪丸組織總蛋白中cyclin B1的含量與對照組沒有顯著差異。
　　 AR免疫組化結果顯示其定位于大鼠睪丸組織的細線期和偶線期精母細胞核、11期精子頭部以及間質細胞胞質中。棉甾聯(lián)合用藥組間質細胞的陽性出現在細胞核。
　　 綜上所述，Cdc25A定位于正常大鼠睪丸精母細胞和圓形精子細胞的不同部位，表明其在精子發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。Cdc25A在圓形精子

5、細胞頂體部位的大量表達提示Cdc25A與頂體的形成有關。低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥使Cdc25A在各部位的表達趨勢改變，說明棉甾聯(lián)合用藥對精子發(fā)生減數分裂過程中Cdc25A功能的正常發(fā)揮產生潛在影響。Cyclin B1定位于大鼠睪丸組織的間質細胞和圓形精子細胞中，棉甾聯(lián)合用藥組中cyclin B1的變化結果證實棉甾聯(lián)合用藥明顯影響間質細胞的功能，而對精子發(fā)生過程中cyclin B1的功能發(fā)揮沒有產生直接影響。檢測AR的蛋白表達水平，發(fā)