辛伐他汀抑制血管緊張素Ⅱ誘導的心肌成纖細胞膠原合成的機制研究.pdf

1、目的：心肌纖維化的主要病理過程包括心肌成纖維細胞(Cardiac fibroblasts)增殖、Ⅰ型膠原(Collage type Ⅰ)及Ⅲ 型膠原(Collage type Ⅲ)合成增加和細胞外基質的無序沉積。心肌成纖維細胞在心肌纖維化的形成過程中起了至關重要的作用。血管緊張素II(Angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)對心肌成纖維細胞的結構和功能具有重要影響可以促進心肌成纖維細胞的增殖及表型轉化，刺激心肌成纖維細胞合成和分泌多種細

2、胞因子如骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)和整合蛋白（B3 integrin），促進轉錄因子NF-Κb(Nuclear factor-Κb)和AP-1(activator protien-1)的活化。3 羥基－3 甲基－戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶抑制劑又稱他汀類藥物如辛伐他汀(Simvastatin ,Sim)，具有良好的治療動脈粥樣硬化的作用

3、，大系列臨床研究發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物也能降低血脂水平正常患者的心血管事件的發(fā)生率，它對冠心病合并心力衰竭患者的保護作用，特別是抗纖維化的作用引起醫(yī)學界的高度關注。近年來研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物可以改善AngⅡ 導致的心肌肥大、心肌纖維化等心肌重構作用，且不依賴于血脂的降低。在體外試驗中發(fā)現(xiàn)HMG-CoA 還原酶抑制劑阿托伐他汀可以直接抑制心肌成纖維細胞的增殖及膠原的合成。但是其中的分子機制未被闡明。本研究以心肌成纖維細胞為研究對象，探討辛伐他汀的

4、以下作用：對心肌成纖維細胞的增殖和轉化的影響；對核轉錄因子的活化合成的影響；對骨橋蛋白和整合蛋白表達的影響。試圖進一步闡明辛伐他汀抑制膠原合成的機制，為防治心肌纖維化提供新的思路和實驗依據(jù)。
　　 方法：原代心肌成纖維細胞培養(yǎng)，第3-5代心肌成纖維細胞用于實驗。分為AngⅡ組(AngⅡ 10-7mol/L)；空白對照組；小劑量Sim 組(Sim10-7mol/L+AngⅡ10-7mol/L)；中劑量Sim 組(Sim10-6mo

5、l/L+AngⅡ10-7mol/L)；大劑量Sim 組(Sim10-5mol/L+AngⅡ10-7mol/L)。MTT 法測定細胞增殖水平，細胞免疫化學檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)、B3 整合蛋白、骨橋蛋白、Ⅰ 型膠原和Ⅲ 型膠原在胞漿中的表達及NF-Κb P50 與AP-1-C-Jun 亞基在胞漿合胞核中核轉移過程。Western blot 定量分析骨橋蛋白、NF-Κb-P50 亞基和

6、AP-1-C-Jun 亞基的蛋白合成情況。
　　 結果：⑴AngⅡ促進心肌成纖維細胞合成I型膠原（P<0.01）和Ⅲ型膠原（P<0.01），誘導心肌成纖維細胞的增殖及表型轉化；大，中，小劑量辛伐他汀均能不同程度的抑制AngⅡ促進的I型膠原（P<0.01）和Ⅲ型膠原（P<0.01）的合成，并且隨著辛伐他汀濃度的增加其對Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原表達的抑制程度有增強的趨勢。大，中，小劑量辛伐他汀均能抑制AngⅡ促進的心肌成纖維細胞增殖及表型

7、轉化。⑵AngⅡ 促進心肌成纖維細胞合成骨橋蛋白(P<0.05)及B3整合蛋白(P<0.01)。大劑量及中劑量的辛伐他汀能不同程度的抑制心肌成纖維細胞合成骨橋蛋白(P<0.01)；大，中，小劑量辛伐他汀均能抑制AngⅡ促進心肌成纖維細胞合成B3整合蛋白(P<0.01)。⑶大，中，小劑量辛伐他汀不同程度抑制AngⅡ促進的NF-Κb-P50亞基蛋白合成(P<0.01)和AP-1-C-Jun亞基的蛋白合成(P<0.01)。⑷AngⅡ促進NF-

8、Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基從細胞質轉移到細胞核，小劑量辛伐他汀阻礙了NF-Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基的核轉位，大劑量辛伐他汀抑制了NF-Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基在胞核及胞漿中的表達。
　　 結論：辛伐他汀能夠抑制心肌成纖維細胞的表型轉化、增殖從而抑制了Ⅰ 型膠原和Ⅲ 型膠原合成。其機制可能與辛伐他汀抑制了骨橋蛋白和B3整合蛋白的合成，抑制了核轉錄因子NF-Κb和AP-1 活化及合