慢性非細菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌細胞BKca通道對膜電位影響及意義.pdf

1、目的:探討慢性非細菌性前列腺炎(Chronic Abacterial Prostatitis,CAP)SD大鼠模型炎癥組與正常對照組前列腺平滑肌細胞(Prostate Smooth Muscle Cells,PSMCs)大電導鈣激活鉀離子通道(Big-conductanceCa2+-activatedK+Channels,BKca)對細胞膜電位影響及其在CAP中的意義。
　　方法:隨機將40只SPF級2月齡雄性SD大鼠分為慢性非細

2、菌性前列腺炎模型組和正常對照組(以下分別簡稱炎癥組和對照組)。炎癥組大鼠行去勢手術,一周后觀察大鼠手術切口愈合良好,皮下注射17β-雌二醇0.25mg/kg,對照組每只大鼠皮下注射生理鹽水0.6ml,均為每日1次,連續(xù)注射30d后,CO2吸入法處死大鼠,無菌條件下迅速取出前列腺組織置入含雙抗的DMEM培養(yǎng)液中,小心剔除前列腺包膜及周圍脂肪、血管等其他組織,獲得較為純凈的前列腺組織一分為二,一部分用于細胞培養(yǎng),另一部分組織經(jīng)HE染色、石蠟

3、包埋切片后光鏡觀察。體外組織塊貼壁法培養(yǎng)并純化PSMCs,運用免疫組化SP法證實培養(yǎng)出的細胞為平滑肌細胞。PSMCs經(jīng)膜電位敏感的熒光染料DiBAC4孵育后在激光共聚焦顯微鏡(Laser Confocal Microscopy,LSCM)下動態(tài)定量觀察激活BKca通道所引起的膜電位變化。
　　結(jié)果:炎癥組和對照組均于體外成功培養(yǎng)出前列腺平滑肌細胞,光鏡下呈梭形或多邊形,核大居中,傳代純化后呈條梭狀排列,符合平滑肌細胞組織學特征,經(jīng)

4、免疫組化染色示α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)陽性。炎癥組前列腺組織經(jīng)HE染色鏡下見腺管管腔及周圍間質(zhì)大量炎性細胞浸潤等典型的炎癥反應表現(xiàn),對照組無明顯炎癥表現(xiàn)。激活BKca通道后炎癥組與對照組PSMCs細胞膜均發(fā)生超極化,兩組效應均能被BKca通道特異性阻滯劑Iberiotoxin(IbTX)阻斷而減弱。但炎癥組超極化幅度明顯減低,兩組細胞超極化效應引起的DIBAC4熒光強度變化值分別為18