結核分枝桿菌北京家族多重耐藥菌株CCDC5180、藥物敏感菌株CCDC5079與BCG的蛋白質組學初步研究.pdf

1、結核分枝桿菌(MTB)是影響人類健康的主要病原體之一，北京家族(Beijing family)是造成我國結核病傳播的主要基因型。多耐藥菌株CCDC5180、敏感菌株CCDC5079是從我國流行的北京家族基因型中篩選出的兩株測序株?？ń槊?BCG)是預防和控制結核病使用最廣泛的疫苗，但對成人缺乏有效的保護力。 為從蛋白質水平上較全面地了解結核分枝桿菌北京家族的生物學特征、耐藥機制，本研究采用十二烷基磺酸鈉變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(S

2、DS-PAGE)、雙向凝膠電泳(2-DE)以及質譜(MS)技術對CCDC5180、CCDC5079與BCG進行了蛋白質組學的初步研究。 SDS-PAGE結果顯示本次分析的三株菌的菌體蛋白圖譜非常相似，有14.4KD- 1182.1KD共40條蛋白條帶，其中14.8KD、23.6KD、66.0KD蛋白的相對表達量較大，大部分蛋白集中在25.0KD-84.2KD之間，用SDS-PAGE較難發(fā)現(xiàn)兩者間的明顯差異。 為此又進行了

3、2-DE圖譜比較，采用商業(yè)的24cm pH4-7(非線性)膠條進行第一向分離，第二向分離采用12.5％的聚丙烯酰胺凝膠。經硝酸銀染色后發(fā)現(xiàn)它們的2-DE圖譜很相似，在CCDC5180、CCDC5079及BCG菌株的2-DE凝膠上分別檢測到1563、1620、1654個蛋白質斑點，大部分蛋白質點等電點分布在pH4.0-pH6.5范圍內；銀染分辨率高，但質譜鑒定率低下，目前我們只能對2-DE分離菌株的菌體蛋白進行膠體考馬斯亮藍G-250染色

4、，然后進行MALDI-TOF-MS和MS/MS質譜鑒定。在2-DE考染圖譜上分別檢測到718、767、1019個蛋白斑點，質譜分析整理出了443、436、486個蛋白點信息，去冗余后最終鑒定了226、149、165種蛋白。通過生物信息學分析，整理了蛋白質組表達庫，獲得了大部分蛋白相應的基因名、編碼框及功能分類等基本信息，并發(fā)現(xiàn)一些數(shù)據(jù)庫中未曾報道的蛋白，可能是北京家族基因型的特異蛋白，需要進一步深入研究。在CCDC5079與CCDC51

5、80菌株的2-DE圖譜差異比較中發(fā)現(xiàn)，有7個蛋白點表達豐度增加，4個蛋白點表達豐度下降，新增加蛋白5個，缺失2個;CCDC5079與BCG相比，有5個蛋白點表達豐度增加，8個表達豐度下降，新增蛋白7個，缺失3個;CCDC5180菌株BCG相比，4個蛋白點表達豐度增加，18個下降，新增點2個，缺失4個。通過對蛋白質組表達庫和圖譜差異蛋白的研究，將更好地了解結核分枝桿菌的耐藥機制，為尋找新的藥物靶標蛋白、新疫苗構建及開發(fā)新的診斷試劑提供理論