三色堇耐熱資源初步篩選與熱激蛋白70基因表達(dá)分析.pdf

1、在前期對(duì)三色堇資源田間調(diào)查的基礎(chǔ)上，于2014年4-7月對(duì)26份三色堇資源進(jìn)行耐熱性田間鑒定，并對(duì)不同耐熱性三色堇資源在高溫脅迫下的生理生化特性進(jìn)行研究；開展了不同三色堇資源HSP70基因的克隆，并對(duì)HSP70基因在高溫脅迫下的表達(dá)進(jìn)行了研究，主要研究結(jié)果如下：
　?。?）三色堇表型性狀調(diào)查顯示，供試26份三色堇資源在株高、株幅、花徑、葉長(zhǎng)、葉寬、分枝數(shù)、花數(shù)、花色等表型性狀上均存在較大差異，具有豐富的表型多樣性；以高溫下三色堇的

2、外觀形態(tài)和生長(zhǎng)狀況為主要鑒定標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出3份耐熱三色堇資源，分別為HAR、DFM-16、DFM-17。
　　（2）高溫脅迫下，不同三色堇資源光化學(xué)效率均出現(xiàn)不同程度的下降，且耐熱資源較不耐熱資源下降幅度小，細(xì)胞膜透性變化小，熱害指數(shù)低，脯氨酸含量升高幅度大，表現(xiàn)出對(duì)高溫環(huán)境更強(qiáng)的適應(yīng)性；高溫處理下5份三色堇資源 POD、CAT活性均低于常溫對(duì)照，SOD活性相對(duì)穩(wěn)定。
　?。?）試驗(yàn)共獲得4份不同三色堇資源的HSP70基因片

3、段，其中E01、DFM-16、DFM-17長(zhǎng)1571bp，08H長(zhǎng)1572bp，序列相似率為98.33％，與參考基因片段和擬南芥HSP70的相似率分別為93.06％和74.13％，與蓖麻、可可樹等植物HSP70基因序列相似率均在84％以上；4份三色堇資源的HSP70基因片段相似率高且高度保守，系同源基因；依據(jù)HSP70基因保守性特點(diǎn)和堿基序列的相似率，初步確定獲得的4個(gè)基因片段為三色堇HSP70片段。
　　（4）常溫處理下，不同耐

4、熱性三色堇資源的HSP70基因表達(dá)量無(wú)顯著差異，隨處理溫度的升高，HSP70基因表達(dá)量升高，42℃條件下，耐熱資源DFM-16的表達(dá)量最高，為常溫參照的2.5倍；常溫下，隨處理時(shí)間的增加，耐熱資源DFM-16與不耐熱08H的HSP70基因表達(dá)量均無(wú)顯著變化；42℃處理下，隨處理時(shí)間的增加，DFM-16與08H的HSP70基因的表達(dá)量均急劇升高，在2 h時(shí)分別達(dá)到常溫參照的6倍和17倍，其中耐熱資源 DFM-16的表達(dá)量顯著高于不耐熱資源