SD大鼠脊髓損傷前后外周血和損傷局部T淋巴細胞亞群的變化.pdf

1、研究背景：傳統(tǒng)的觀點認為CNS損傷后的自身免疫反應會加重繼發(fā)性損害不利于神神經再生。近年來，以色列研究小組提出“保護性自身免疫”學說，即CNS損傷后的自身免疫反應同時具有神經保護和促進神經再生的積極作用。我們認為導致學術界爭論不休的原因：SCI后外周血和損傷局部的T淋巴細胞可能存在不同的功能亞群，有的亞群具有神經保護性潛能，而另外的則可能具有神經損害潛能， SCI后功能恢復的最終結果可能要決定于這些不同細胞亞群之間的平衡。
　　目

2、的：檢測SD大鼠脊髓損傷前及損傷后不同時間外周血及損傷局部T淋巴細胞亞群的變化，并對這些細胞亞群的變化及功能作用和機制進行初步探討。
　　方法：1.用紐約大學脊髓撞擊儀，SD大鼠制備中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動物模型并評估其效果。
　　2.用流式細胞儀、CD3-FITC、CD8-PE、CD4-PE、CD25-Percp、FOXP3-APC檢測SCI前后外周血CD3、CD4T、CD8T細胞亞群和Treg細胞亞群。
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3、.用密度梯度離心方法分離新鮮脊髓局部浸潤的淋巴細胞，用流式細胞術檢測SCI前后CD3CD8陽性、CD3CD4陽性和Treg細胞亞群。
　　4.采用CD4和FoxP3雙色免疫熒光標記抗體，檢測SCI前后局部浸潤的CD4陽性細胞和Treg細胞。
　　結果：
　　1.用紐約大學脊髓撞擊儀10g*25mm撞擊SD大鼠的T9脊髓致SD大鼠雙下肢肌力活動喪失，造成截癱。病理觀察有顯著差異，中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動物模型成功制備

4、。
　　2.SCI前后不同時間點SD大鼠外周血CD3+CD8+/CD3+，Treg/CD4+比例無明顯化，無顯著性差異（p>0.05）。SCI后1、3、5天，1周的CD3+T細胞，CD3+CD4+T細胞比例，以及 CD3+CD4+/ CD3+CD8+比值明顯低于 SCI前有顯著性差異（p<0.05）。在SCI后2周，上述各T細胞亞群的比例均恢復到術前水平，兩時間點之間比較無顯著性差異（p>0.05）。
　　3.流式細胞術檢測

5、正常SD大鼠脊髓局部檢測不出CD3陽性T細胞，損傷后檢測到浸潤的CD3陽性細胞，其中局部CD4陽性T細胞術后第3天分別與術后第1、3周之間有顯著差異(p<0.05)，脊髓損傷局部CD4陽性T細胞術后第1周與術后第3周之間有顯著差異(p<0.05)，CD8陽性T細胞的比例在術后第3天分別與術后第1、3周之間有顯著差異(p<0.05)，Treg的比例在術后第2周較高分別與第3天、第1周、第3周之間有顯著差異性(P<0.05)。
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6、.采用組織免疫熒光染色技術檢測正常SD大鼠脊髓檢測未發(fā)現CD4+，Treg細胞，局部 CD4細胞數量除了 SCI術后1周與術后第2周、第3周之間比較無差異(p>0.05)，余各個時間點兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)，局部Treg細胞數量除了SCI術后1周與術后3周之間比較無差異外(p>0.05)，余各個時間點兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)，局部Treg/CD4比值SCI后第1天和2周兩個高峰之間無差異p>0.05，SCI后3

7、天，1周，3周之間無差異(p>0.05)，余各個時間點兩兩之間有顯著性差異(p<0.05)。
　　結論：
　　1.用紐約大學脊髓撞擊儀制備 SD大鼠的中等程度撞擊損傷的脊髓損傷動物模型是較理想可靠的方法。
　　2. SD大鼠SCI手術后外周血中主要是CD3淋巴細胞、CD3+CD4+淋巴細胞的比例及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值下降。SD大鼠SCI手術后外周血中CD3+CD8+淋巴細胞的比例及Treg/CD3+C

8、D4+淋巴細胞的比例無明顯變化。
　　3.流式細胞術檢測正常SD大鼠脊髓檢測不出活化的T細胞，與損傷后出現T淋巴細胞相比有顯著差異。相對外周血而言，損傷局部浸潤的T細胞主要 CD3CD4細胞為主，比例上升，CD3CD8細胞比例下降，Treg細胞/CD3CD4細胞比例下降。
　　4.采用組織免疫熒光染色技術分析正常SD大鼠脊髓未檢測到CD4T及Treg細胞，損傷后CD4T、Treg細胞、Treg/CD4上升明顯，有顯著差異性。