霍亂弧菌毒力基因tcpP調(diào)控基因的篩選及LysR蛋白功能的研究.pdf

1、霍亂弧菌既是自然水生環(huán)境中的常著菌也是引起人類腹瀉疾病霍亂的病原體。霍亂弧菌的主要致病因子有ctxAB基因編碼的霍亂毒素CT；TCP致病性島，它編碼TCP菌毛，該菌毛是霍亂弧菌在宿主腸道的定殖因子，也是CTXφ的受體；toxR，一個基本的毒力調(diào)節(jié)基因，編碼CT和TCP的基因都受ToxR調(diào)控。
　　 本文以霍亂弧菌LZV608為研究對象，通過質(zhì)粒pSC123上的Mariner轉(zhuǎn)座子的隨機(jī)插入構(gòu)建突變子文庫，用熒光素酶基因作為報告基

2、因，篩選到影響霍亂弧菌毒力基因tcpP表達(dá)的5個突變株，經(jīng)過Arbitrary PCR擴(kuò)增、DNA測序以及BLAST分析后確定轉(zhuǎn)座子插入的基因分別是aphA，aphB，與代謝途徑相關(guān)的激酶aroK，未知功能的假設(shè)蛋白以及甲基趨化性蛋白VC1405。
　　 通過構(gòu)建VC1405的框內(nèi)缺失突變株以及VC1405回復(fù)突變菌株，發(fā)現(xiàn)VC1405缺失后tcpP的表達(dá)量降低，表現(xiàn)為報告基因lux的光值降低，而在回復(fù)突變菌株中光值可以恢復(fù)。根

3、據(jù)報道AphA和AphB相互協(xié)同，作用于tcp操縱子正調(diào)控TcpPH，我們通過熒光素酶檢測菌株證明VC1405對tcpP的調(diào)控并不是通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子aphB和aphA實(shí)現(xiàn)的。
　　 LysR轉(zhuǎn)錄調(diào)控家族（LTTR s）是一類被深入研究的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。LTTRs在細(xì)菌細(xì)胞中發(fā)揮著廣泛的調(diào)控功能，其調(diào)控的目的蛋白參與了細(xì)菌的新陳代謝、細(xì)胞分裂、群體感應(yīng)、毒力、運(yùn)動性、固氮和抗氧化反應(yīng)等?；魜y弧菌中大約有40個LysR家族蛋白，其中有