組織激肽釋放酶結合蛋白細胞膜受體的分離鑒定與其抗腫瘤分子機制的研究.pdf

1、研究背景
　　細胞因子的胞內功能發(fā)揮,一般需要與細胞膜受體結合后經特定信號傳導通路進行,或由受體介導入胞后發(fā)揮其生物學活性。Kallistatin(Kal)是一種組織激肽釋放酶結合蛋白,也是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,具有多種生物學功能,如降血壓、舒張血管、抗炎、抗氧化、抗纖維化、促進新生內膜的形成、抑制血管生成和腫瘤的生長等。目前發(fā)現(xiàn)的Kal膜受體有肝素硫酸蛋白聚糖(HSPGs),介導Kal的抗新生血管生成作用;有低密度脂蛋白受體相

2、關蛋白6(LRP6),介導Kal的抗腫瘤作用;還有Kruppel樣轉錄因子4( Kruppel-like factor4,KLF4),介導Kal的抗炎作用。這三個Kal受體的發(fā)現(xiàn),在一定程度上解釋了Kal部分功能,但尚不足以闡釋Kal的多功能特點。我們判斷蛋白,Kal的多功能應該是多靶點多通路作用的結果,應該還有未被發(fā)現(xiàn)的Kal膜受體。
　　研究目的
　　分離、鑒定Kal細胞膜結合蛋白,驗證細胞膜結合蛋白在Kal抗血管生成和

3、抗腫瘤中的作用,為揭示Kal的多功能性以及涉及的分子機制等奠定基礎。
　　研究方法
　　(1)制備重組人Kal(rhKal),利用Pull-Down、LC-MC/MC、免疫共沉淀、免疫熒光等技術分離、鑒定rhKal細胞膜結合蛋白。
　　(2)利用siRNA、抗體封閉等技術,分析rhKal膜結合蛋白在rhKal抗血管生成和抗腫瘤作用中的作用。
　　(3)利用流式細胞儀、Western Blotting等方法,分析細

4、胞膜結合蛋白對介導rhKal入胞的作用。
　　(4)采用細胞培養(yǎng)及分析方法,分析rhKal與候選rhKal細胞膜結合蛋白所涉及的信號通路。
　　(5)利用皮下移植瘤模型,分析候選rhKal細胞膜結合蛋白介導rhKal的抗血管生成和抗腫瘤活性的分子機制。
　　研究結果
　　(1)首次發(fā)現(xiàn)核仁素、整合素β3、金屬基質蛋白酶2(MMP2)、血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)、VEGFR2為rhKal細胞膜結合蛋白。

5、
　　(2)首次發(fā)現(xiàn)核仁素是介導rhKal入胞的重要受體,并參與rhKal體內外抗腫瘤新生血管形成的過程。
　　(3)首次發(fā)現(xiàn)核仁素介導rhKal抗血管生成的分子機制是:rhKal通過而下調蛋白激酶CK2的表達抑制核仁素磷酸化,從而抑制由VEGF和堿性成纖維細胞因子(bFGF)所誘導的血管內皮細胞增殖。
　　(4)首次發(fā)現(xiàn)整合素β3可以介導rhKal的抗腫瘤活性。
　　(5)首次發(fā)現(xiàn)整合素β3介導rhKal抗腫瘤