FAK基因在肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、徐州醫(yī)學院碩士學位論文FAK基因在肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的作用姓名：尹濤申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（普外）指導教師：李向農(nóng)20060401徐州醫(yī)學院碩士學位論文FAK基因在肝癌增殖轉(zhuǎn)移中的作用中文摘要(目的)利用體外化學合成siRNA技術(shù)，封閉焦點黏附激酶(FAK)基因翻譯過程，從而產(chǎn)生基因沉默效應，使得肝癌細胞的增殖及轉(zhuǎn)移能力下降，進而為肝癌的基因治療提供理論依據(jù)。(方法)根據(jù)人肝癌的FAK基因序列，設計合成含21個堿基的FAKsiRN

2、A及隨機陰性對照siRNA—co。在陽離子脂質(zhì)體的介導下轉(zhuǎn)染肝癌細胞。分別于轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h收集細胞，用半定量RTPCR方法檢測轉(zhuǎn)染后FAKmRNA表達的變化；以腫瘤細胞侵襲實驗檢測肝癌細胞侵襲性的變化；MTT實驗觀察siRNA轉(zhuǎn)染對肝癌細胞活性的影響。FCM法測定FAK基因的蛋白表達。(結(jié)果)體外化學合成的siRNA通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染肝癌細胞后，能夠有效地抑制FAK的表達。轉(zhuǎn)染后半定量RTPCR檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)AKmRNA的表

3、達在轉(zhuǎn)染24h有降低，48h抑制作用最為明顯，72h抑制作用較48h時減弱。MTT試驗結(jié)果顯示，siRNA轉(zhuǎn)染后肝癌細胞的活性受到明顯抑制(p0叭)。腫瘤細胞侵襲試驗測定結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后肝癌細胞侵襲能力減弱，轉(zhuǎn)染48h后最明顯。FCM法測定FAK基因的蛋白表達，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后肝癌細胞中FAK基因的蛋白表達明顯降低(pO01)。(結(jié)論)FAKsiRNA可特異性抑制肝癌細胞FAKmRNA的表達，抑制肝癌細胞的活性，降低肝癌細胞的侵襲能力，