陜西五地土樣中昆蟲病原線蟲共生菌殺蟲殺菌活性菌株篩選及鑒定.pdf

1、昆蟲病原線蟲共生菌是存在于昆蟲病原線蟲腸道內的菌革蘭氏陰性菌，屬腸桿菌科細菌Enterobacteriaceae，共包含致病桿菌屬Xenorhabdus和發(fā)光桿菌屬Photorhabdus，分別與斯氏線蟲Steinernematidae和異小桿線蟲Heterorhabditidae共生。昆蟲病原線蟲共生菌能產生多種代謝產物，在醫(yī)療衛(wèi)生和農業(yè)上具有抑菌、殺蟲、殺線蟲、抗?jié)?、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性。國內對昆蟲病原線蟲共生菌的研究較少

2、，主要集中在從國外引種、保種等工作上，關于昆蟲病原線蟲共生菌的分離鑒定工作的研究還不夠深入。本研究從陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺5地采集土樣500份，分離其中昆蟲病原線蟲，篩選昆蟲病原線蟲共生菌，在對共生菌的生物活性研究基礎上，確定了其種屬分類地位，研究得到如下主要結果： 1、對采自陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺等5地的500份土樣中的線蟲系統(tǒng)篩選結果表明，土樣線蟲含有率為95.6％，研究發(fā)現(xiàn)線蟲的分布與土壤質地、土壤

3、濕度、土壤肥沃程度、植被、當地寄主及季節(jié)等因素有關；分離得到2種昆蟲病原線蟲；從2種昆蟲病原線蟲中篩選到2株共生菌，1株為Ⅰ型共生菌，1株為Ⅱ型共生菌，Ⅰ型共生菌為目標菌株，命名為TB。 2、對菌株TB的殺蟲殺菌生物活性進行了較為系統(tǒng)研究。(1)殺菌活性。在離體條件下，采用生長速率法測定了TB菌株發(fā)酵液對11種病原真菌的生長抑制作用，TB菌株發(fā)酵液在稀釋10倍的條件下，對11種植物病原真菌有不同程度的抑菌活性，其中對辣椒疫霉病菌

4、、番茄灰霉病菌和小麥紋枯病菌的抑制作用最強，抑制率分別為99.99％、99.11％和99.99％；采用孢子萌發(fā)法測定昆蟲病原線蟲共生菌發(fā)酵液對番茄灰霉孢子萌發(fā)的抑制作用，實驗表明TB菌株發(fā)酵液對番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)有推遲作用。活體實驗結果表明TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對小麥白粉病的保護效果達到43.8％，治療效果為30.6％。(2)殺蟲活性測定表明，TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對粘蟲和小菜蛾無明顯觸殺、胃毒活性，但對5齡粘蟲具有較強的血腔毒性，在

5、每頭注射10μL的劑量下，對5齡粘蟲的致死率為90％。 3、運用形態(tài)學、生理生化指標測定、分子生物學等方法對菌株TB進行了鑒定。形態(tài)觀察和生理生化指標測定結果可初步推斷TB菌株為致病桿菌屬(Xenorhabdus)細菌；經PCR擴增TB菌株的16SrDNA，測得16SrDNA的全序列長度為1536個堿基，利用DNAMAN5.2.2軟件的MultipleSequenceAlignment進行多序列同源性分析，采用鄰接法構建了TB菌