大鼠腦中催產(chǎn)素受體cDNA的克隆和在大腸桿菌與CHO細胞內(nèi)的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該工作的主要結果如下：1.成功地從分娩后大鼠的腦和子宮組織中,利用RT-PCR的方法克隆得到OTR的cDNA編碼區(qū)全序列;應用DNA序列比較軟件MegAlign對腦和子宮中的OTR的cDNA編碼區(qū)全序列進行比較,發(fā)現(xiàn)來源于腦和子宮組織的OTR cDNA編碼區(qū)序列是完全一致的,且大小均為1167bp.2.將OTR cDNA編碼區(qū)全長亞克隆至pET-28-α載體、將OTR cDNA編碼區(qū)5端420bp、5端120bp和3端168bp的片段分

2、別亞克隆至pGEX-4T-3載體,然后將這些重組質粒在大腸桿菌BL21內(nèi)進行表達,發(fā)現(xiàn)只有5端120bp,即編碼OTR氨基端胞外域的基因片段能夠在大腸桿菌內(nèi)高效表達.3.優(yōu)化誘導表達的條件,得到大量水溶性的OTR氨基端胞外域與GST的融合蛋白（GST-OTRN<,40>）,利用Sepharose 4B柱親和層析純化了此融合蛋白.4.將OTR cDNA編碼區(qū)全長亞克隆至真核表達載體pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1（+）-FLAG和

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