人工培育的長座線蟲草抗菌活性研究及其化學成分分析.pdf

1、長座線蟲草Ophiocordyceps longissima(Kobayasi) Sung et al.是寄生于同翅目蟬若蟲上的一種重要的蟲生真菌，其無性型為長座被毛孢。本文對長座線蟲草人工培養(yǎng)物的抗菌活性及其化學成分進行了較為系統(tǒng)的研究，主要內容包括：對其無性型菌株RCEF3891進行了液體和固體培養(yǎng)，用4種處理方法對人工培養(yǎng)子實體和液體搖瓶菌絲體進行浸提，采用杯碟法對6種細菌和1種真菌進行抑菌試驗，檢測浸提物的抑菌活性，選出指示菌，

2、并對抑菌活性高的提取物中的活性組分進行了分離純化和結構鑒定；同時，測定了人工培養(yǎng)物的部分有效成分并應用LC-MS對甲醇提取物進行了成分分析。
　　抑菌試驗結果表明：人工培養(yǎng)長座線蟲草子實體和菌絲體的水提物和甲醇提取物對蘇云金芽孢桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌有抑菌作用，特別是對后者的抑制作用較為明顯。冬蟲夏草菌絲體的水提物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和綠膿桿菌有較弱的抑制作用，對其他供試菌物沒有抑制作用。3種人工培養(yǎng)物的乙

3、酸乙酯提取物對供試菌均沒有抑菌活性。人工培養(yǎng)長座線蟲草子實體和搖瓶菌絲體的提取物在80℃水浴加熱后，仍具有抑菌活性，表明其抑菌活性成分有較高的耐熱性。
　　實驗采用半制備型色譜柱對提取物組分進行初步分離，以抑制白色念珠菌為測定指標對分離組分進行了活性測定，確定出一種活性組分p-1。試驗進一步用分析柱分離，成功制備出該活性組分。
　　經LC-TOF-MS和NMR數據解析得知，化合物p-1的分子式為C21H39NO6，系統(tǒng)學名為

4、2S，3R，4R，6E-2-氨基-3，4-二羥基-2-羥甲基l-14-氧-6-二十烯酸，即為多球殼菌素（Myriocin），該化合物在長座線蟲草屬首次發(fā)現且含量較高。
　　對長座線蟲草三種人工培養(yǎng)物（子實體、固體平板菌絲體和孢梗束）的部分成分分析結果表明：菌絲體中灰分總量最高，顯著高于孢梗束和子實體中灰分的含量。長座線蟲草搖瓶菌絲體中氨基酸總量（26.68 g/100g）、必須氨基酸總量最高（7.4g/100g），顯著高于孢梗束（

5、22.94、8.03 g/100g）和子實體（20.81、7.97 g/100g）中氨基酸、必須氨基酸的總量。三種人工培養(yǎng)物的麥芽糖含量相當，差異不顯著，子實體中海藻糖和葡萄糖含量最高。
　　通過對液體搖瓶菌絲體中多球殼菌素含量的培養(yǎng)優(yōu)化：確定12~15d為最佳培養(yǎng)時間，通過對五種不同液體培養(yǎng)基的篩選，確定出培養(yǎng)液Ⅴ為最優(yōu)培養(yǎng)基；進一步對7種碳源和7種氮源的篩選，確定出麩皮和酵母粉為最佳碳源和氮源。
　　對長座線蟲草菌絲體和