2-BFI減輕EAE小鼠CNS損傷與抑制小膠質細胞活化及iNOS和COX-2表達有關.pdf

1、目的:觀察咪唑啉2受體(I2R)配體2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠中樞神經系統(tǒng)(CNS)氧化應激反應的影響，探索2-BFI減輕EAE的可能藥理學作用。
　　方法:將C57BL/6小鼠隨機分為3組:正常對照組(saline)、EAE對照組(EAE-saline)和2-BFI干預組(EAE-2BFI)，每組9只。EAE對照組和2-BFI干預組用MOG35-55與CFA混合抗原乳

2、劑免疫小鼠制作EAE模型，正常對照組小鼠用生理鹽水與CFA混合抗原乳劑進行免疫。2-BFI干預組于EAE造模后第0天開始，按20mg/kg給予腹腔注射2-BFI，2次/天，連續(xù)14天。正常對照組和EAE對照組用等量的生理鹽水替換2-BFI以同樣的方法腹腔注射14天。免疫當日定為第0天，每日觀察并記錄動物行為學變化。各組動物于發(fā)病高峰期統(tǒng)一處死，取腦、脊髓和視神經進行下列實驗檢測:蘇木素-伊紅(HE)染色觀察中樞神經系統(tǒng)炎性細胞浸潤;Lu

3、xol Fast Blue染色觀察髓鞘脫失;透射電子顯微鏡觀察神經元、血腦屏障(BBB)及視神經的超微結構變化;免疫組織化學方法測定小膠質細胞標志物Iba-1和iNOS蛋白的表達水平;Real-time PCR法測定iNOS和COX-2 mRNA的表達水平;比色法檢測丙二醛(MDA)的含量;并對神經功能缺損癥狀評分、活化的小膠質細胞數量、iNOS蛋白、COX-2和iNOS mRNA表達水平進行線性相關分析。
　　結果:
　　

4、1.行為學觀察:正常對照組小鼠未出現神經功能缺損癥狀;EAE對照組小鼠最早發(fā)病開始于免疫后第9天，表現為活動減少、食欲減退，繼而表現出尾部肌力下降、尾巴拖地不能抬起、步態(tài)異常、后肢無力、癱瘓。各組動物EAE誘發(fā)率分別為:正常對照組(0/9)，EAE對照組(9/9)，2-BFI干預組(6/9)，2-BFI干預后EAE的誘發(fā)率呈下降趨勢;2-BFI干預組平均潛伏期為13.67±1.15天，與EAE對照組(13.63±1.21)比較無顯著性差

5、異;但2-BFI干預組日均神經功能缺損評分明顯低于EAE對照組(p＜0.01)，最大神經功能缺損評分為4.00±1.36天，較EAE對照組(11.88±1.42)亦明顯降低（p＜0.01）。
　　2.病理學改變:正常對照組小鼠未觀察到炎性細胞浸潤及髓鞘脫失。HE染色示EAE對照組脊髓內有許多炎性病灶，病灶處小血管周圍有大量的炎性細胞浸潤，成“袖套”樣改變，伴有脊膜增厚。從形態(tài)學上看，浸潤的炎性細胞以淋巴細胞為主，可見一定量的巨噬細

6、胞。2-BFI干預組小鼠脊髓內炎性細胞浸潤數量明顯減少，病理評分為1.35±0.69，較EAE對照組(2.60±0.90)明顯降低(p＜0.01)。EAE對照組Luxol Fast Blue染色可見髓鞘有不同程度脫失，2-BFI干預組髓鞘脫失嚴重程度較EAE對照組減輕。
　　3.透射電子顯微鏡觀察結果:正常對照組小鼠神經元、BBB及視神經超微結構正常。神經元細胞核核內染色質聚集邊集，粗面內質網附著的核糖體數和線粒體數量減少，部分線

7、粒體水腫;EAE對照組腦組織微血管內皮細胞核固縮，緊密連接擴張，吞飲小泡數量增多，有的可見連接內皮細胞的基質和基膜斷裂，微血管周圍的膠質細胞偽足腫脹，微血管管腔狹窄; EAE對照組小鼠視神經髓鞘結構松散、斷裂或融合，2-BFI干預組小鼠神經元、BBB及視神經損傷程度與EAE對照組相比均減輕。
　　4.免疫組化結果:與正常對照組相比，EAE對照組小鼠CNS內活化的小膠質細胞數量及iNOS蛋白表達明顯增加(p＜0.01);與EAE對照

8、組相比，2-BFI干預組活化的小膠質細胞數量（p＜0.05）及iNOS蛋白表達（p＜0.01）明顯減少。
　　5.Real-time PCR結果:與正常對照組相比，EAE對照組小鼠CNS內iNOS和COX-2 mRNA表達水平明顯增加(p＜0.01);與EAE對照組相比，2-BFI干預組小鼠CNS內iNOS和COX-2 mRNA表達水平降低，并有顯著性差異(p＜0.05)。
　　6.MDA檢測結果:EAE對照組小鼠CNS內M