谷胱甘肽對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞化療敏感性的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)胃腺癌SGC7901細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物多柔比星(ADM)和依托泊苷(VP-16)的敏感性,再聯(lián)合2-氨基4-(S-丁基磺酰亞氨)丁酸(BSO)和乙酰半胱氨酸(NAC)在改變細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的含量前提下進(jìn)一步檢測(cè)胃腺癌SGC7901細(xì)胞對(duì)ADM和VP-16的敏感性,分析前后敏感性變化的機(jī)制,為臨床胃癌的化療增敏劑藥物研究提供有價(jià)值的理論基礎(chǔ)。
　　方法：(1)利用噻唑藍(lán)比色法(MTT法)作BSO無(wú)毒濃度的測(cè)定,

2、同法測(cè)定胃腺癌SGC7901細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物ADM和VP-16的半數(shù)抑制濃度(IC50)值,作為對(duì)照組?；钚匝?ROS)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在BSO的無(wú)毒濃度和實(shí)驗(yàn)常選用5mmol/LNAC預(yù)處理情況下測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平,并在20％IC50ADM和20%IC50VP-16濃度的預(yù)處理下測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平,均作為對(duì)照組。(2)利用MTT法測(cè)定胃腺癌SGC7901細(xì)胞在BSO聯(lián)合ADM和BSO聯(lián)合VP-16預(yù)處理下的I

3、C50值,同法測(cè)定在NAC聯(lián)合ADM和NAC聯(lián)合VP-16預(yù)處理的IC50值,并與(1)中對(duì)照組進(jìn)行差異統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ROS檢測(cè)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在BSO聯(lián)合20%IC50ADM和BSO聯(lián)合20%IC50VP-16預(yù)處理下細(xì)胞內(nèi)ROS水平,同法檢測(cè)NAC聯(lián)合20%IC50ADM和NAC聯(lián)合20%IC50VP-16預(yù)處理下細(xì)胞內(nèi)ROS水平,并與(1)中對(duì)照組進(jìn)行差異統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(3)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在未作BSO和NAC預(yù)處理下

4、通過(guò)GSH和GSGG試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH的含量,作為對(duì)照組,進(jìn)一步檢測(cè)BSO在無(wú)毒濃度預(yù)處理?xiàng)l件下和5mmol/LNAC預(yù)處理后細(xì)胞內(nèi)GSH的含量,與對(duì)照組進(jìn)行差異統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(4)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在未作BSO和NAC預(yù)處理下通過(guò)γ-谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)γ-GCS活力,并作為對(duì)照組,進(jìn)一步檢測(cè)BSO無(wú)毒濃度預(yù)處理?xiàng)l件下和5mmol/LNAC預(yù)處理細(xì)胞內(nèi)γ-GCS的活力,與對(duì)照組進(jìn)行差異統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

5、。(5)胃腺癌SGC7901細(xì)胞未作BSO和NAC預(yù)處理情況下通過(guò)細(xì)胞免疫組化觀測(cè)細(xì)胞膜上MRP1和P-GP表達(dá)量,并作為對(duì)照組,同法在BSO無(wú)毒濃度預(yù)處理?xiàng)l件下和5mmol/LNAC預(yù)處理后觀測(cè)細(xì)胞膜上MRP1和P-GP表達(dá)量,與對(duì)照組進(jìn)行差異統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：(1)BSO對(duì)胃腺癌SGC7901的IC50值為3.5mg/ml,無(wú)毒濃度檢測(cè)為0.7mg/ml,ADM和VP-16對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞的IC50值分別是3.

6、4ug/ml和17μg/ml。胃腺癌SGC7901細(xì)胞在未作任何處理?xiàng)l件下測(cè)定的ROS水平為2.73。胃腺癌SGC7901細(xì)胞在BSO無(wú)毒濃度下預(yù)處理測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平為5.82,5mmol/LNAC預(yù)處理細(xì)胞內(nèi)ROS水平為0.97,在20%IC50ADM和20%IC50VP-16濃度的預(yù)處理下細(xì)胞內(nèi)ROS水平分別為5.12和4.29.(2)胃腺癌SGC7901細(xì)胞經(jīng)BSO預(yù)處理的ADM和VP-16的IC50值分別為1.12ug/ml

7、和4.74ug/ml,與(1)中對(duì)照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01),同法NAC預(yù)處理的ADM和VP-16的IC50值分別為4.42ug/ml和21.23ug/ml,與(1)中對(duì)照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。無(wú)毒濃度的BSO預(yù)處理20%IC50ADM和20%IC50VP-16細(xì)胞內(nèi)ROS水平分別為6.30和6.08,與(1)中對(duì)照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。5mmol/LNAC

8、預(yù)處理20%IC50ADM和20%IC50VP-16細(xì)胞內(nèi)的ROS水平分別為2.09和3.00,與(1)中對(duì)照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。(3)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在未作BSO和NAC預(yù)處理下檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH的水平為2.31umol/gprotein,進(jìn)一步在BSO無(wú)毒濃度預(yù)處理?xiàng)l件下和5mmol/LNAC預(yù)處理檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH的水平分別是0.18umol/gprotein和12.67umol/gprotein

9、,與對(duì)照組相比,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。(4)胃腺癌SGC7901細(xì)胞在未作BSO和NAC預(yù)處理下檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)γ-GCS活力的水平為10.80umol/gprotein,進(jìn)一步檢測(cè)BSO無(wú)毒濃度預(yù)處理?xiàng)l件下細(xì)胞內(nèi)γ-GCS的活力的水平為7.62umol/gprotein,與對(duì)照組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),然而5mmol/LNAC預(yù)處理檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)γ-GCS活力的水平為11.43umol/gprotein,與對(duì)照

10、組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p﹥0.05)。(5)5mmol/LNAC單獨(dú)處理SGC7901細(xì)胞后,細(xì)胞膜上的MRP1和P-GP與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(p﹥0.05),通過(guò)無(wú)毒濃度的BSO處理后,細(xì)胞膜上的MRP1和P-gp與對(duì)照組比較也無(wú)明顯差異(p﹥0.05)。
　　結(jié)論：(1)BSO是γ-GCS活性的特異性抑制劑,NAC對(duì)γ-GCS的活性無(wú)明顯影響。(2)BSO對(duì)細(xì)胞內(nèi)GSH水平有明顯的抑制作用,聯(lián)合ADM和VP-16能對(duì)胃腺癌SG

11、C7901細(xì)胞內(nèi)ROS的水平有進(jìn)一步的提高作用,作為化療藥物的增敏劑有明顯的增敏作用。(3)NAC對(duì)細(xì)胞內(nèi)的GSH有明顯的促進(jìn)作用,聯(lián)合ADM和VP-16能對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞內(nèi)ROS水平有明顯的抑制作用,降低了化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性,為BSO是引起GSH的下降引起的化療敏感性的增強(qiáng)起到很好的佐證(。4)胃腺癌SGC7901細(xì)胞膜上的MRP1和P-GP在5mmol/LNAC和無(wú)毒濃度BSO的作用下未發(fā)生明顯的表達(dá)變化,說(shuō)明BS