姜黃素對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞離子通道的影響.pdf

1、目的：本項(xiàng)同擬采用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù),系統(tǒng)觀(guān)察姜黃素對(duì)急性分離的大鼠心室肌細(xì)胞鈉通道(INa)、L型鈣通道(ICa-L)、鉀通道(包括瞬時(shí)外向鉀通道Ito、內(nèi)向整流鉀通道Ik1)電流的影響,探討姜黃素對(duì)心肌細(xì)胞的離子通道作用機(jī)制。
　　 方法：采用急性酶解分離法,以改良Langendorff逆行主動(dòng)脈灌流模式,分離大鼠心室肌細(xì)胞,獲得成活率高,狀態(tài)穩(wěn)定的心室肌細(xì)胞。采用電極拉制儀拉制尖端大小適度,電阻恒定并適合封接的玻璃電極。

2、實(shí)驗(yàn)前吸取少許富含細(xì)胞的細(xì)胞保護(hù)液(KB液)于灌流槽中靜置,待細(xì)胞沉底附壁后,用細(xì)胞外液進(jìn)行表面灌流。在倒置顯微鏡下,用微操縱儀將充好電極內(nèi)液的玻璃電極移向細(xì)胞膜,負(fù)壓吸引,形成高阻封接,打破細(xì)胞膜后形成全細(xì)胞記錄模式,針對(duì)各種不同通道選用不同的刺激方式,記錄INa、ICa-L、Ito和Ik1原始曲線(xiàn)。用加藥系統(tǒng)灌流50μmol/L姜黃素5min,觀(guān)察50μmol/L的姜黃素對(duì)IN啊、ICa-L、Ito和Ik1的影響,計(jì)算其抑制率,并研

3、究其對(duì)各通道電流密度-電壓曲線(xiàn)的影響。
　　 結(jié)果：通過(guò)酶解法得到大鼠心室肌細(xì)胞能夠記錄到各種離子通道電流。表明其具有良好的細(xì)胞電生理特性。
　　 以測(cè)試電壓-30mV,對(duì)5個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞的INa峰值電流密度作為觀(guān)察指標(biāo),得出50μmol/L姜黃素灌流前后INa的電流密度分別為(-17.0±3.8)(pA/pF)和(4.7±1.0)(pA/pF)(P<0.01),抑制率為(72±6)％。INa的激活電壓在-60 mV,

4、峰電位在-30mV,反轉(zhuǎn)電位在+20mV。50μmoI/L的姜黃素對(duì)所有指令電壓條件下均引起INa的降低,使電流密度-電壓曲線(xiàn)上移,不改變激活電位和反轉(zhuǎn)電位,峰值電位稍右移。
　　 以測(cè)試電壓10 mV,對(duì)5個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞的ICa-L峰值電流密度作觀(guān)察指標(biāo),得出50μmol/L姜黃素灌流前后ICa-L的電流密度分別為(-6.4±0.8)(pA/pF)和(-6.5±1.4)(pA/pF)(P>0.05),抑制率為(-2±13)％

5、。ICa-L的激活電壓為-30 mV,峰值電位在10 mV,反轉(zhuǎn)電位+35 mV。50μmol/L的姜黃素對(duì)ICa-L的電流密度-電壓曲線(xiàn)沒(méi)有明顯影響。
　　 以測(cè)試電壓50mV,對(duì)5個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞的Ito峰值電流密度作觀(guān)察指標(biāo),得出50μmol/L姜黃素灌流前后Ito的電流密度分別為(7.7±3.3)(pA/pF)和(1.1±0.8)(pA/pF)(P<0.05),抑制率為(84±11)％。Ito的激活電壓在-30 mV,電

6、流隨刺激電壓增高而增大,并呈現(xiàn)出外向整流的特點(diǎn)。50μmol/L的姜黃素對(duì)所有指令電壓條件下均引起Ito的降低,但不改變其外向整流的特點(diǎn)。
　　 以測(cè)試電壓-80 mV,對(duì)5個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞的Ik1峰值電流密度作觀(guān)察指標(biāo),得出50μmol/L姜黃素灌流前后Ik1的電流密度分別為(-9.6±1.1)(pA/pF)和(-4.0±1.1)(pA/pF)(P