微管作用化療藥物誘導胃癌細胞自噬-自噬性細胞死亡及其與胃癌細胞凋亡敏感性的關系.pdf

1、背景及目的：以微管為作用靶點的化療藥物，如紫杉醇、長春新堿等，能誘導多種惡性腫瘤(包括胃癌)細胞凋亡，但不同細胞株的凋亡敏感性有很大差別；自噬本是細胞一種正常的生理活動，但近年來研究發(fā)現在一些治療因素下，腫瘤細胞中異常的自噬活動能影響腫瘤細胞的轉歸，一方面，自噬會導致某種形式的程序性細胞死亡，凋亡和自噬性細胞死亡可能作為彼此的后備機制執(zhí)行不可逆細胞死亡的指令，另一方面，自噬可能是腫瘤細胞的一種保護機制，減輕了不良因素對細胞凋亡的誘導作用

2、。目前國內外尚無關于自噬及自噬性細胞死亡在化療誘導胃癌細胞死亡中作用的報道。本研究旨在了解胃癌細胞在對微管作用化療藥物的反應中自噬和自噬性細胞死亡的存在，以及自噬和凋亡的相互關系，從而對促進胃癌細胞對化療藥物的敏感性提出新的思路。 方法：Annexin V/PI雙染流式細胞術和MTT法分別檢測紫杉醇、長春新堿誘導SGC-7901及BGC-823細胞的凋亡率和總死亡率，死細胞DAPI染色熒光顯微鏡檢測非凋亡性細胞死亡，吖啶橙染色流

3、式細胞儀和熒光顯微鏡分別定量、定性檢測自噬和自噬性細胞死亡的存在，免疫印記法檢測Beclin 1蛋白表達，自噬特異性阻斷劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)和紫杉醇共同作用抑制細胞自噬后流式細胞術檢測細胞凋亡率的變化，caspase廣譜抑制劑(z-VAD-FMK)和紫杉醇共同作用抑制細胞凋亡后流式細胞術檢測細胞自噬率的變化。 結果：1．紫杉醇和長春新堿可以誘導胃癌SGC-7901和BGC-823細胞凋亡，并且具有劑量和時間依賴性，但兩株

4、細胞對藥物誘導的凋亡敏感性不同。紫杉醇0.1μmol/l、長春新堿50μg/ml作用于SGC-7901細胞48h凋亡率達50％，作用于BGC-823細胞48h凋亡率分別為34.57％±5.55％和38.90％±1.27％，所以，BGC-823細胞相對SGC-7901細胞為對紫杉醇、長春新堿誘導的細胞凋亡不敏感細胞株。由細胞凋亡率和總死亡率之間的顯著差別，并結合死亡細胞DAPI染色結果證明紫杉醇、長春新堿可以誘導胃癌細胞出現非凋亡性細胞死

5、亡，死亡細胞吖啶橙染色熒光顯微鏡檢測結果提示這種非凋亡性細胞死亡是自噬性細胞死亡，輔助免疫印記實驗的結果證實了自噬性細胞死亡的存在并且與Beclin 1基因激活有關。2．紫杉醇、長春新堿處理SGC-7901和BGC-823細胞早期(24h內)即可出現明顯的細胞自噬性變化，紫杉醇誘導的自噬高峰期出現在藥物作用3h-6h，長春新堿誘導的自噬高峰期出現在藥物作用24h-36h，并且BGC-823細胞相對為對紫杉醇、長春新堿誘導的細胞自噬敏感的