螺旋神經節(jié)神經元的切割分離法培養(yǎng).pdf

1、目的：建立一種簡單而且穩(wěn)定可靠的分離鼠耳蝸螺旋神經節(jié)神經元(spiralganglionneurons，SGNs)的培養(yǎng)方法。 方法：根據(jù)SGNs分離的方法不同分為切割分離法組(A組)、消化法組(根據(jù)消化酶的種類、酶消化的時間不同再分為B、C、D組)。A組把分離得到螺旋神經節(jié)組織塊，剪切成相同的8-10塊后接種到已用多聚賴氨酸包被的35mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。消化法把分離得到的螺旋神經節(jié)組織塊移到裝有D-Hanks溶液的4ml的離心管

2、中，B組加入0.25％胰蛋白酶+0.001％DNas的消化酶溶液溶液，在37℃作用20分鐘后，加入含血清的培養(yǎng)液中止消化，1000rpm離心5分鐘，棄上清，加入含血清的培養(yǎng)基輕輕的吹打后接種培養(yǎng)，其他步驟與A組相同。C組單用含0.25％胰蛋白酶的消化酶溶液，作用20分鐘。D組，用0.25％胰蛋白酶+0.001％DNas的消化酶溶液溶液，作用30分鐘，其余操作與B組相同。倒置顯微鏡下觀察比較各組培養(yǎng)SGN細胞的活力以及生長與分化過程。對S

3、GNs神經元進行免疫細胞化學染色鑒定。 結果：A組培養(yǎng)的神經細胞、神經突起生長良好，細胞存活時間1-2周。B組分離培養(yǎng)的神經細胞總數(shù)與A組差別不顯著，神經突起生長的長度比A組短。C、D組培養(yǎng)1周后，神經細胞總數(shù)比A組少，存活時間較A組短，神經突起生長比A組短。 結論：成功建立了切割分離法分離與培養(yǎng)螺旋神經節(jié)細胞的方法，與消化法相比，其操作簡單，可以取得酶解組織同樣的效果，滿足體外多種實驗的需要。 耳蝸螺旋神經節(jié)神

4、經元(Spiralganglionneurons，SGNs)是聽覺系統(tǒng)的一級神經元，在聽覺的傳到過程中起著重要作用。藥物(化療藥物)、噪聲等因素容易引起內耳細胞——毛細胞、螺旋神經節(jié)神經元的損傷，毛細胞的損失還可以導致螺旋神經節(jié)神經細胞的繼發(fā)性退行性退變。哺乳動物的螺旋神經節(jié)神經元的再生能力非常低[1]，直接、間接的損傷導致永久性的聽力下降，因此，受損的SGNs的保護與修復對恢復聽力起關鍵性作用。本文對螺旋神經節(jié)神經元的損傷與保護因素及