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文檔簡介
1、目的: 用轉化生長因子(TGF-β1)誘導人腎小管上皮細胞(HK-2)轉分化,探討轉分化過程中可能的細胞信號轉導機制;丹酚酸B(SA-B)對HK-2細胞轉分化過程的干預作用。
方法: TGF-β1 (5ng/ml)刺激HK-2,用特異性細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)抑制劑PD98059(25 μmol/L)、鈣通道拮抗劑Nifedipine(10 μmol/L)及丹酚酸B(SA-B)(10μmol/L)處理;于不同時間段分用
2、免疫熒光、S-P法和免疫印跡的方法檢測黏著斑激酶(FAK)、整合素β1(β1-Integrin)。
結果:
①相比空白組TGF-β1成功誘導HK-2轉分化。
②TGF-β1刺激15min后FAK-Tyr397磷酸化增強,60min達頂峰。相比TGF-β1對照組,PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化減弱(P<0.05)而Nifedipine無明顯抑制作用(P>0.05),PD98059與N
3、ifedipine協(xié)同作用明顯(P<0.01),SA-B具有同樣抑制作用(P<0.01)。
③相比對照組,PD98059、SA-B使FAK蛋白表達呈時間依賴性減弱(前者P<0.05;后者P<0.01),PD98059與Nifedipine協(xié)同作用明顯(P<0.01)。
④PD98059及Nifedipine均呈時間依賴性抑制β1-Integrin表達(P<0.05)。兩者協(xié)同作用明顯(P<0.01);SA-B
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