術后早期草酸鉑腹腔化療對大鼠結腸吻合口愈合影響及GM-CSF干預效應的實驗研究.pdf

1、中晚期胃腸癌根治術后發(fā)生腹膜種植轉移率約為4％～19％，常給予全身化療，患者中位生存期為5.2～12.6個月。國外學者對根治性手術聯(lián)合術中經(jīng)腹膜腔化療，包括術后早期腹腔化療(early postoperative intraperitoneal chemotherapy，EPIC)進行了Ⅱ期、Ⅲ期的臨床研究，結果顯示局部復發(fā)率降低，患者生存期延長。但是必須權衡由于早期腹腔化療延緩了胃腸吻合口的愈合，所帶來的術后并發(fā)癥發(fā)生的風險。至今，化

2、療藥物是否損害消化道吻合口的愈合尚存爭議，多數(shù)的研究認為術后早期腹腔化療對腸吻合口的愈合有著不利的影響<'[1～6]>。 目的：通過術后早期腹腔注射草酸鉑(oxaliplatin，L-OHP)研究對大鼠結腸吻合口愈合的影響及粒．巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulatingfactor，GM-CSF)的干預效應，以期為臨床中消化道腫瘤術后早期應用草酸鉑腹腔化療提供理論依據(jù)

3、。 方法：健康Wistar大鼠60只，隨機分為3組：Control組(A組)、L-OHP組(B組)和L-OHP+GM-CSF組(C組)，每組20只。每組內(nèi)再隨機分為2個亞組，即：術后7天，14天。經(jīng)腹正中切口行結腸離斷術，結腸斷端行端端吻合術，A組術后24h腹腔注射生理鹽水20ml/kg；B組術后24h腹腔注射草酸鉑20mg/kg；C組結腸吻合完成后，在吻合口兩側漿膜下層用21G注射器注射GM-CSF 50gg，術后24h腹腔注

4、射草酸鉑同B組。比較3組動物的一般情況，腸吻合口的并發(fā)癥，吻合口組織的羥脯氨酸含量、破裂壓以及Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維含量。3組大鼠術后7d，14d，采用按原手術入路開腹，確定吻合口位置，大體觀察有無吻合口并發(fā)癥發(fā)生；參考Van Der Ham測定法，測吻合口破裂壓，記錄壓力曲線突然降低時的數(shù)值為腸吻合口破裂壓值。以吻合口為中心切取長約6cm的結腸，等分為兩部分，一部分固定于4％多聚甲醛，常規(guī)石蠟包埋切片，分別行HE染色和免疫組織化學染色，光鏡

5、下觀察吻合口愈合情況及測定Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維含量，由圖像分析儀進行分析，結果取像素(pixels,p)和面積(μm<'2>)平均值的乘積；另一部分組織于-80℃深低溫冰箱保存，按堿水解法測定吻合口組織中羥脯氨酸含量。所得數(shù)據(jù)采用SAS v6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。 結果： 1 一般情況：術后各組大鼠無一例死亡，Control組大鼠術后6h恢復活動力，接受腹腔化療的實驗動物，均較Control組大鼠活動力下降，表現(xiàn)為倦

6、怠，對外界刺激反應遲鈍，10％(2/20)動物大便呈稀水樣改變。 2 大體形態(tài)：3組均有不同程度的腹腔粘連，以L-OHP組最為顯著；共5例發(fā)生吻合口瘺，其中L-OHP組3例(術后7d，2例；術后14d，1例)，L-OHP+GM-CSF組2例(術后7d，2例；術后14d，0例)，Control組未發(fā)生吻合口并發(fā)癥，無統(tǒng)計學意義(P=0.25)。 3 吻合口破裂壓：術后第7d，L-OHP組與Control組、L-OHP+GM

7、-CSF組之間吻合口破裂壓比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05)；術后第14d，3組之間吻合口破裂壓無明顯差異(P>0.05)。 4 羥脯氨酸含量：術后第7d，L-OHP組吻合口組織羥脯氨酸含量最低，與Control組、K-OHP+GM-CSF組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05)；術后第14d，3組之間羥脯氨酸含量比較無明顯差異(P>0.05)。 5 Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維含量：術后第7d，L-OHP組Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維含量顯