IL-23-Th17細胞在EAE中作用的探討.pdf

1、目的：建立慢性-非緩解性EAE的小鼠模型，運用ELISA、RT-PCR、流式細胞術等方法在mRNA和蛋白水平檢測IL-23/Th17及其相關細胞因子IL-17在小鼠腦及脾組織中不同時期的表達情況，以探討IL-23/Th17在多發(fā)性硬化（MS）中發(fā)病的免疫學機制。
　　方法：將45只8到12周清潔級健康雌性C57BL/6小鼠，隨機分為佐劑對照組（n=21只）和EAE組（n=24只）。EAE組中根據疾病的發(fā)展階段又分為發(fā)病初期、發(fā)病高

2、峰期、慢性期組。EAE組用完全弗氏佐劑和人工合成的MOG35-55混合后免疫C57BL/6小鼠，佐劑對照組用等量的PBS代替MOG35-55，按照Bensen評分標準進行評分，運用ELISA方法檢測各組各時期小鼠的外周血IL-23、IL-17的分泌水平、流式細胞術方法檢測脾淋巴細胞Th17細胞數量、實時熒光定量RT-PCR技術檢測小鼠腦組織中IL-23P19亞基的動態(tài)表達情況。
　　結果：
　　1.小鼠模型EAE組小鼠發(fā)病率

3、為75％（18/24）,最高臨床評分5分；佐劑對照組均無發(fā)病跡象，臨床評分0。
　　2.ELISA EAE組小鼠外周血IL-17含量與佐劑對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)，各期均升高，其中高峰期升高明顯（P<0.05），慢性期有所下降，但與高峰期相比無統(tǒng)計學差異（P>0.05），佐劑對照組小鼠各期之間無差異（P>0.05）。IL-23含量各佐劑對照組之間無差異（P>0.05），EAE組較對照組顯著升高，其中發(fā)病初期升高最明

4、顯（P<0.05）。
　　3.流式細胞術檢測小鼠脾淋巴細胞中Th17細胞/淋巴細胞比例佐劑對照組各期均呈低表達，各期之間差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05），EAE組較對照組表達上調，高峰期升高最明（P<0.05）。
　　4.實時熒光定量RT-PCR結果顯示 EAE組腦組織中 IL-23P19含量較佐劑對照組明顯升高（P<0.05），其中發(fā)病初期表達量最高，高峰期表達有所下降（兩組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05），慢性期表達下降