UGT1A1基因與成人高膽紅素血癥-風險研究與定量比較.pdf

1、第一部分UGT1A1基因測序和風險分析
　　目的：完善UGT1A1基因的突變庫，探討不同突變位點對高膽紅素血癥的風險值。
　　方法：按入組標準研究共入組104個血清總膽紅素水平升高人群作為實驗組和105個血清總膽紅素水平正常人群作為對照組，并對人群進行UGT1A1基因的增強子PBREM區(qū)、啟動子TA盒以及5個外顯子的基因檢測。
　　結果：本研究人群所檢測到11個可能與血清膽紅素水平升高相關的UGT1A1基因突變位點中，

2、總人群檢出率超過10％的共有3個，即PBREM突變(c.-3275T>G)、啟動子TA盒重復突變（A（TA）7TAA）以及p.G71R（c.211G>A），3者均可增加膽紅素升高的風險值（P>0.05），其中啟動子TA盒重復的純合突變（OR=17.79,2.11-133.61）和p.G71R純合突變（OR=14.93,1.83-121.88）是血清膽紅素水平升高明顯的危險因素。當膽紅素在正常范圍內波動時，PBREM、啟動子TA盒重復突變

3、和p.G71R均存在較高的檢出率且各自維持在一定的水平，三者在正常組的平均水平分別高達26.7%、9.1%和15.7%。
　　結論：PBREM、啟動子TA盒重復突變和p.G71R是上海地區(qū)常見的與膽紅素升高相關的UGT1A1突變位點，在正常人群中也有一定的突變發(fā)生率，啟動子TA盒重復的純合突變和p.G71R純合突變是血清膽紅素水平升高明顯的危險因素。
　　第二部分不同基因突變組合血清總膽紅素和UGT1的定量比較
　　目

4、的：通過定量的方法探索不同基因突變人群的血清總膽紅素和UGT1波動情況。
　　方法：采用ELISA定量法檢測入組人群血清UGT1的含量。按研究對象所攜帶的不同SNP進行分組，以無突變位點攜帶的人群為對照組進行血清總膽紅素和血清UGT1水平的定量比較。
　　結果：對膽紅素的定量比較發(fā)現(xiàn)，只有有義突變（包括p.G71R）及A(TA)7TAA純合突變所引起的膽紅素升高值才具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），c.-3275T>G純合突變

5、和A(TA)7TAA雜合突變所引起的膽紅素水平的升高無明顯的統(tǒng)計學意義（P>0.05）。而不同的基因型組合的血清UGT1水平并無明顯的統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結論：UGT1A1有義突變以及A(TA)7TAA，是引起成人膽紅素水平升高最主要的遺傳基礎，單一的增強子c.-3275T>G不足以引起明顯的血清膽紅素升高。
　　第三部分不同SNPs連鎖不平衡分析和基因劑量效應
　　目的：聯(lián)合UGT1A1基因不同SNPs

6、探索血清膽紅素水平升高的原因。
　　方法：分別統(tǒng)計本研究所檢測的UGT1A1基因各個SNP的分布，計算不同位點之間連鎖不平衡的D’和r2。
　　結果：本研究結果顯示PBREM突變(c.-3275T>G)和TA盒的重復突變A（TA）7TAA存在明顯的連鎖不平衡關系（D’=0.964，r2=0.345），而c.-3275T>G和c.211G>A突變之間連鎖不平衡分析顯示D’=1.0，r2=0.142。比較研究對象SNP攜帶情況和

7、血清膽紅素的關系發(fā)現(xiàn)，編號907患者攜帶有啟動子TA盒重復突變、p.P229Q、p.P364L以及p.R367H共4個不同的SNPs，而該患者是所有入組成員中膽紅素水平最高者。
　　結論：增強子c.-3275T>G和啟動子A（TA）7TAA之間存在明顯的連鎖不平衡關系，UGT1A1基因不同SNPs存在一定的基因劑量效應，增強子c.-3275T>G對膽紅素升高的作用可能主要體現(xiàn)在基因的連鎖不平衡和劑量效應。
　　第四部分生物信

8、息學與UGT1A1有義突變
　　目的：從生物信息學角度初步探討本研究所檢測到UGT1A1基因有義突變的意義。
　　方法：從NCBI上搜得涵蓋完整氨基酸的UGT1A1基因所編碼的氨基酸序列，并經由PHYRE2進行UDPGT蛋白結構的預測。通過HGMD、UniProt以及NCBI等多種途徑進行匯總所有已報道的與膽紅素升高相關的UGT1A1突變位點，并與本研究所檢測到的位點進行對比。
　　結果：目前，已報道的與膽紅素升高相關

9、（包括CN1，CN2和GS等）的UGT1A1基因有義突變涉及編碼區(qū)533個氨基酸中的73個氨基酸（79種錯譯氨基酸），涉及UGT1A1基因的全部5個外顯子。本研究所測得的11個UGT1A1基因SNPs中出現(xiàn)4個新的UGT1A1有義突變位點，分別是p.S199C、p.T338I、p.R367H和p.E453Q，分別位于UGT1A1基因編碼區(qū)的第1、3、4和5外顯子。
　　結論：本研究新發(fā)現(xiàn)的4個UGT1A1突變位點為p.S199C、