用于單子葉植物轉化的幾丁質酶基因載體構建及玉米再生體系建立.pdf

1、真菌性病害長期以來一直是限制玉米產量、影響玉米品質的主要病害，嚴重影響著玉米生產的發(fā)展。常規(guī)育種技術不僅育種周期長，耗時費力，難以滿足生產上對抗病良種的需要，更重要的是玉米抗性資源比較缺乏，限制了傳統方法在玉米抗病育種中的成效?；蚬こ碳夹g在玉米育種上的應用，可以將存在于其它物種的抗病基因引入到玉米種質材料中，提高玉米抗病性，加速抗病育種進程。故本研究從原核表達載體pETChi上切下幾丁質酶基因片段，取代植物表達載體pBIUA上的Res

2、基因片段，構建含ubi啟動子和幾丁質酶基因的適合于單子葉植物表達的載體pBIUC，以期將幾丁質酶基因導入玉米優(yōu)良自交系，為增強玉米對真菌性病害抗性的研究做準備。 植株再生體系的建立，是植物基因工程操作的基礎。本研究選取目前國內大面積種植的6個玉米骨干自交系，以幼胚作為外植體，誘導出愈傷組織，并選擇愈傷組織誘導率較高的綜3、鄭58和K12三個品種建立再生體系，同時研究了影響幼胚再生的各種因素。研究表明：2，4-D對玉米幼胚愈傷組織

3、誘導率有很大的影響，愈傷誘導的2，4-D最佳濃度為2.0mg/l；胚性愈傷組織的誘導在很大程度上依賴于基因型，從最高誘導率93.1﹪(綜3)到最低誘導率24.4﹪(昌7-2)；玉米幼胚愈傷組織分化成苗時不同基因型所需的最適6-BA濃度也不同，綜3的愈傷組織分化成苗的最佳6-BA濃度為1.5mg/l，鄭58和K12愈傷組織最適分化成苗的6-BA濃度均為1.0mg/l；本試驗建立的移栽程序：分化培養(yǎng)基→再生培養(yǎng)基→花盆中基質培養(yǎng)，可以使移栽

4、成活率達80﹪以上。 本研究選取幼胚再生體系建立時表現最好的基因型綜3為材料，以其成熟胚作為外植體，利用正交試驗研究了2，4-D、6-BA、NAA、脯氨酸和水解酪蛋白5個因素及組合對綜3成熟胚愈傷組織誘導的影響，探討了正交設計應用于玉米培養(yǎng)基篩選的可能性。同時對誘導出的愈傷組織進行分化培養(yǎng)，以期建立該基因型玉米的成熟胚植株再生體系。研究表明：綜3成熟胚愈傷組織誘導的最佳激素組合是2，4-D(2.5mg/l)+6-BA(1.5mg