特異性清除髓鞘組織的轉基因斑馬魚的構建.pdf

1、髓鞘是保護、支持和營養(yǎng)軸突的多層膜性結構，在中樞神經系統(tǒng)，髓鞘由成熟的少突膠質細胞伸出突起包繞軸突形成;而在外周神經系統(tǒng)則由施萬細胞構成。髓鞘介導神經沖動的正常、快速傳遞，是神經系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的結構基礎。當髓鞘在遺傳因素和/或外在環(huán)境因素作用下受到損傷，便會引起多發(fā)性硬化等的脫髓鞘疾病，除髓鞘脫失外，還可能會出現軸突的退化，患者的感覺、運動和識別等功能出現不同程度的喪失。但是，髓鞘脫失的機制依舊不確定，利用動物模型深入研究髓鞘脫失與再

2、生就顯得尤為重要。斑馬魚具有體外發(fā)育、胚胎透明、遺傳學技術成熟等優(yōu)勢，同時斑馬魚的髓鞘在形成、結構和功能上與人類類似，是進行髓鞘損傷與再生研究的理想模型。
　　Tol2轉座子是在脊椎動物中發(fā)現的唯一具有自主轉座活性的轉座元件，可攜帶長達11kb的外源插入片段完成轉座，而不引起自身轉座活性的降低，大大提高了轉基因的效率。硝基還原酶(NTR)/甲硝唑(Mtz)系統(tǒng)是近年來在斑馬魚研究領域應用日益廣泛的一種化學-基因技術，NTR能把無毒

3、的甲硝唑轉變?yōu)榧毎拘源x物，進而僅導致NTR表達陽性的細胞死亡，由此實現特定細胞的可控性、可逆性清除。本研究中，我們克隆了髓鞘堿性蛋自啟動子，構建了轉基因斑馬魚Tg（mbp:nfsB::EGFP），少突膠質細胞譜系細胞被綠色熒光蛋白特異性標記，并攜帶NTR。將甲硝唑作用于Tg（mbp:nfsB::EGFP）幼魚，能夠特異性清除少突膠質細胞，出現髓鞘脫失，并出現運動能力下降等行為學改變。在脫離藥物作用后，髓鞘可以部分再生，而運動能力也有