CA IX在人乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)遷移和侵襲轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、乳腺癌是嚴(yán)重威脅女性身心健康的惡性腫瘤之一，而乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響其療效的主要因素。因此，迫切需要尋找一個(gè)敏感性好且能較早預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物及能夠抑制其遷移運(yùn)動(dòng)和轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)，為臨床對(duì)乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移做出早期預(yù)測(cè)提供一定的參考依據(jù)，從而有助于及時(shí)采取更加有效的治療措施。缺氧是包括乳腺癌在內(nèi)的惡性實(shí)體瘤發(fā)展過(guò)程中普遍存在的現(xiàn)象。為了適應(yīng)或克服缺氧環(huán)境，腫瘤組織內(nèi)部會(huì)發(fā)生一系列包括無(wú)氧代謝增加、細(xì)胞凋亡抑制、新生血管形

2、成、腫瘤局部浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)等在內(nèi)的缺氧反應(yīng)。缺氧反應(yīng)通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α來(lái)啟動(dòng)和調(diào)節(jié)，從而形成一系列由HIF-1α介導(dǎo)的缺氧反應(yīng)調(diào)控通路，其下游CAⅨ被認(rèn)為是一種可靠的缺氧標(biāo)記物，不僅能調(diào)節(jié)細(xì)胞酸堿平衡、介導(dǎo)細(xì)胞間信息交流，還與細(xì)胞黏附以及腫瘤的惡性進(jìn)展關(guān)系密切。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：人乳腺癌組織CAⅨ的表達(dá)及其與臨床參數(shù)的關(guān)系。
　　目的：闡明人乳腺癌組織中CAⅨ的表達(dá)情況及其與臨床參數(shù)（包括預(yù)后

3、）的關(guān)系。
　　方法：采用免疫印跡(Western blot)的方法檢測(cè)11例人乳腺癌組織及對(duì)應(yīng)正常組織中CAⅨ的表達(dá)情況;采用IHC的方法在149例人乳腺癌組織標(biāo)本中研究CAⅨ的表達(dá)及其與臨床參數(shù)（包括預(yù)后）的關(guān)系。
　　結(jié)果：11例乳腺癌組織及對(duì)應(yīng)的正常組織經(jīng)Western blot方法檢測(cè)CAⅨ蛋白表達(dá)水平，結(jié)果提示CAⅨ蛋白在部分乳腺癌組織中高表達(dá)，而在乳腺正常組織中幾乎不表達(dá)或低表達(dá)，CAⅨ蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)

4、顯著高于正常乳腺組織(p＜0.001);IHC的結(jié)果顯示，CAⅨ蛋白的表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜;在149例乳腺癌標(biāo)本中，22例樣本中的癌細(xì)胞CAⅨ表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為14.77％; CAⅨ的表達(dá)與腫瘤大小(p=0.019)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.006)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(p＜0.001)和臨床分期(p=0.003)具有顯著的相關(guān)性;149例人乳腺癌組織的Kaplan-Meier生存分析揭示，CAⅨ的高表達(dá)與乳腺癌患者較短的生存期之間有顯著的相關(guān)性（x

5、2=41.080，p＜0.001）;單、多因素生存分析顯示CAⅨ蛋白在乳腺癌患者預(yù)后分析中是一個(gè)獨(dú)立的有預(yù)后意義的分子指標(biāo)(p＜0.001，HR=5.758，95％ CI:2.286-14.502)。
　　結(jié)論：CAⅨ蛋白在部分乳腺癌組織中高表達(dá)，而在乳腺正常組織中幾乎不表達(dá)或低表達(dá)，CAⅨ蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著高于正常乳腺組織;CAⅨ蛋白與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存期具有顯著相關(guān)性;缺氧標(biāo)記物CAⅨ蛋白

6、在乳腺癌患者預(yù)后分析中是一個(gè)獨(dú)立的有意義的分子指標(biāo)。
　　第二部分：CoCl2誘導(dǎo)的CAⅨ表達(dá)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
　　目的：明確缺氧誘導(dǎo)的CAⅨ表達(dá)變化及其對(duì)人乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法：選用兩株人乳腺癌細(xì)胞（高侵襲性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、低侵襲性的乳腺癌細(xì)胞MCF-7），利用CoCl2模擬缺氧環(huán)境來(lái)建立缺氧模型。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為對(duì)照組和缺氧組，細(xì)胞同步化24小時(shí)后，對(duì)照組細(xì)胞

7、培養(yǎng)于含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中，缺氧組細(xì)胞培養(yǎng)于含CoCl2終濃度為200μmol/L的缺氧誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，兩組均在37℃、5％CO2、95％空氣、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48、72小時(shí);采用Western blot的方法檢測(cè)細(xì)胞HIF-1α和CAⅨ蛋白的表達(dá)變化;采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)研究其體外遷移運(yùn)動(dòng)能力的變化;采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)研究其體外侵襲運(yùn)動(dòng)能力的變化。
　　結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)表明，與對(duì)照組相比，

8、缺氧組細(xì)胞經(jīng)200μmol/L CoCl2處理24h、48h、72h后HIF-1α蛋白的表達(dá)均有所上調(diào);經(jīng)CoCl2處理24h、48h后，CAⅨ蛋白的表達(dá)量下降，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，處理72h后，CAⅨ的蛋白表達(dá)顯著上調(diào);CoCl2作用24h后，與對(duì)照組相比，缺氧組細(xì)胞體外遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲能力下降，作用72h后，與對(duì)照組相比，缺氧組細(xì)胞體外遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲能力明顯提高。
　　結(jié)論：CoCl2誘導(dǎo)的化學(xué)缺氧能有效上調(diào)HIF-1α和CA