七氟烷預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響及機制探討.pdf

1、目的:
　　采用大腦中動脈阻塞法制備局灶性腦缺血再灌注模型，觀察七氟烷預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷是否具有保護作用，并探討大腦皮質C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologousprotein，CHOP)在七氟烷預處理減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中的意義。
　　方法:
　　雄性Sprague-Dawley大鼠108只，體重250～280g，隨機分為3組：假手術組(S組)、缺血再灌注組(I/R組)和七氟烷預處理

2、組(Sevo-pc組)。每組大鼠36只，又隨機分為再灌注12h、24h、72h3亞組，每亞組大鼠12只。大鼠麻醉后，分離并結扎右側頸總動脈、頸外動脈，經頸總動脈向頸內動脈插入線栓，稍遇阻力即停止插入，阻斷大腦中動脈血流1h后恢復再灌注，制備局灶性腦缺血再灌注模型。Sevo-pc組大鼠于缺血前1h持續(xù)吸入2.7％七氟烷；S組分離并結扎右側頸總動脈和頸外動脈，不置入線栓。再灌注12h、24h、72h時Longa神經功能缺陷評分完成后，各亞組

3、隨機取6只大鼠斷頭取腦，2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2，3，5-tfiphenyhetrazoliumchloride，TTC)染色測定腦梗死體積比。各亞組余6只大鼠行心臟灌注后斷頭取腦，冠狀切取缺血腦組織，常規(guī)行脫水、透明、浸蠟及包埋。蘇木精-伊紅(hematoxylinandeosin，HE)染色觀察缺血側皮質組織形態(tài)學特征，免疫組織化學染色測定缺血側皮質周圍CHOP蛋白表達，脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記(termi

4、naldeoxynucleotidyltransferasemediatedbiotin-dUTPnickendlabeling，TUNEL)法計數凋亡神經細胞。
　　結果:
　　1.成功制作大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。
　　2.神經功能缺陷評分：S組大鼠未見神經功能缺損。與S組比較，I/R組和Sevo-pc組神經功能缺陷評分顯著升高(P<0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組神經功能缺陷評分降低(P<0.05)

5、。
　　3.HE染色：S組大腦皮質神經細胞層次清晰，細胞數量多、形態(tài)正常；I/R組再灌注12h時出現不同程度的細胞水腫、變性。再灌注24h時細胞排列紊亂，細胞縮小變形，胞質濃縮，胞核固縮、碎裂、溶解。再灌注72h時細胞壞死明顯，膠質細胞增生；Sevo-pc組再灌注各時間點大腦皮質病理變化較I/R組明顯減輕，細胞排列尚規(guī)則。
　　4.TTC染色：S組未見腦梗死灶。與S組比較，I/R組和Sevo-pc組腦梗死體積比顯著升高(P<

6、0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組腦梗死體積比降低(P<0.05)。再灌注24h時，I/R組和Sevo-pc組腦梗死體積比最高(P<0.05)。
　　5.免疫組織化學染色：與S組比較，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質CHOP蛋白表達上調(P<0.05)。與I/R組比較，Sevo-pc組大腦皮質CHOP蛋白表達下調(P<0.05)。再灌注24h時，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質CHOP蛋白表達水平最高(P<0.05)

7、。
　　6.TUNEL染色：與S組比較，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質凋亡細胞數顯著增加(P<0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組大腦皮質凋亡細胞數減少(P<0.05或0.01)。再灌注24h時，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質凋亡細胞數最多(P<0.05)。
　　結論:
　　1.細胞凋亡參與了腦缺血再灌注損傷的病理過程。
　　2.七氟烷預處理具有抑制大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經細胞凋亡的保護作用。