LAPTM5基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、目的
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SystemicLupusErythematosus，SLE)是一種全身多系統(tǒng)受累的慢性進(jìn)行性、反復(fù)發(fā)作的自身免疫性疾病。SLE屬于多基因復(fù)合性疾病[1]，臨床表型具有相當(dāng)大的異質(zhì)性，可累及皮膚、粘膜、腎、肺、心臟、關(guān)節(jié)、血液系統(tǒng)等。其病因和發(fā)病機(jī)制尚未明確，大量研究表明，SLE的發(fā)生發(fā)展與遺傳因素、性激素、感染、環(huán)境誘發(fā)因素以及機(jī)體免疫功能絮亂等因素有關(guān)。目前一般認(rèn)為SLE發(fā)病時(shí)激素和環(huán)境因素觸發(fā)了具有

2、遺傳易感性的個(gè)體發(fā)生免疫學(xué)異常，尤其是體液免疫密切相關(guān)，主要涉及T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞等幾乎所有的單個(gè)核細(xì)胞和多細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)[2]。近年來(lái)，在髓系和淋巴系特異性表達(dá)的溶酶體相關(guān)跨膜蛋白5（LAPTM5）作為L(zhǎng)APTM家族的一員受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注[3]。LAPTM5是TCR和BCR的調(diào)節(jié)器[4，5]，其介導(dǎo)受體的降解與某些自身免疫性疾病相關(guān)[6,7]。我們的前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在高度表達(dá)的LAPTM5的MRL/Ipr

3、小鼠中形成狼瘡樣腎炎。(LupusNephritis，LN)樣改變。位于染色體1p34，在骨髓系和淋巴系特異性表達(dá)LAPTM5蛋白的基因單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）與SLE發(fā)病可能有一定的相關(guān)性。
　　為進(jìn)一步研究LAPTM5基因多態(tài)性與SLE之間的關(guān)系，我們以中國(guó)漢族人群為研究對(duì)象，我們利用數(shù)據(jù)庫(kù)HapMap(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)和軟

4、件Haploview4.2對(duì)其（包含5'上游-4000bp）進(jìn)行多態(tài)分析，篩選出在中國(guó)漢族人群(CHB)中次要等位基因頻率(Minorallelefrequency,MAF)大于0.1的其中1個(gè)標(biāo)簽位點(diǎn)(TagSNP)。應(yīng)用聚合酶連反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法比較LAPTM5基因SNP在SLE病例組和健康對(duì)照組的分布，探討LAPTM5基因與SLE發(fā)病的相關(guān)性。
　　材料和方法
　　一、實(shí)驗(yàn)材料

5、>　?。ㄒ唬┭芯繉?duì)象
　　分析來(lái)自于1999-2004年中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院SLE并患狼瘡腎炎的住院患者與中國(guó)醫(yī)科大學(xué)體檢中心健康人群血樣，病例組SLE患者281例，男25例，女256例，其診斷根據(jù)1982年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn);對(duì)照組健康患者360例，其中男35例，女325例。2組的年齡、性別比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異、并且全部研究對(duì)象無(wú)血緣關(guān)系。
　　（二）主要試劑
　　紅細(xì)胞裂解液、DNA裂

6、解液、TE緩沖液、乙醇，75％乙醇、TENZOL液(Takara)LAPTM5引物（上海生工）、TBE緩沖液、PCR試劑盒（上海生工）、測(cè)序試劑盒(ABI公司)、6×LoadingBuffer,核酸染料，10×NEBUffer2，XcmI、水浴箱，PCR擴(kuò)增儀(AppliedBiosystemsGeneAmpPCR9700)，石蠟、深低溫冰箱、凝膠紫外燈、DNA回收試劑盒等。
　　二、試驗(yàn)方法
　　采用聚合酶連反應(yīng)-限制性片

7、段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法分析中國(guó)漢族人群LAPTM5基因單核苷酸多態(tài)性，通過(guò)計(jì)算LAPTM5基因的基因型和等位基因頻率在SLE病例組和健康對(duì)照組中的分布，進(jìn)而研究LAPTM5基因與SLE相關(guān)性。
　　三、測(cè)序方法
　　應(yīng)用Run3130軟件設(shè)定的程序進(jìn)行自動(dòng)化電泳，序列分析軟件V5.1進(jìn)行序列分析，設(shè)定雜合峰高大于25％的為雜合序列。通過(guò)Blast與基因數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)，獲得基因多態(tài)性信息。
　　

8、四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用卡方檢驗(yàn)，并運(yùn)用SPSS軟件對(duì)SLE病例組和健康對(duì)照組基因型頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，判斷LAPTM5基因多態(tài)性與SLE易感性有無(wú)關(guān)聯(lián)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　在LAPTM5基因A(rs1188348)G位點(diǎn)為1個(gè)有義SNP位點(diǎn)，該位點(diǎn)存在3中基因型，即A/G型、G/G型、A/A型。各型在SLE病例組和健康對(duì)照組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　LAPTM5基因S