HCV NS3解旋酶RNA對HCV自身翻譯具有抑制作用.pdf

1、丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原體，可導致慢性肝炎、肝硬化，部分可發(fā)展成肝癌。目前較為認可的治療方案是干擾素聯(lián)合利巴韋林，但它的副作用較大，花費較高，持續(xù)應答率較低。因此，尋找更為有效的抗HCV治療方法迫在眉睫。由于HCV在體內復制水平低，難以建立一個令人滿意的高效體外復制、感染模型。因此，對HCV生活周期以及其內部基因表達調控的研究顯得非常重要。本課題在研究HCV NS3解旋酶對HCV IRES的翻譯啟動活性的影響，并試圖探討HCV翻譯自

2、身調控的機制。
　　方法:(1)構建HCV NS3全長和HCV NS3解旋酶表達質粒;構建HCV NS3解旋酶的突變型及其表達缺陷質粒;(2)以HCVIRES調控熒光素酶表達的質粒pCMVNCRLuc轉染293T細胞模型作為研究體系，利用磷酸鈣轉染方法，將構建的質粒轉染到該細胞中，轉染24h后檢測熒光素酶表達活性;(3)提取細胞RNA，RT-PCR檢測pCMVNCRLuc、細胞IFN-β和PKR的mRNA的相對表達。
　　結

3、果:(1)質粒酶切鑒定和測序結果證明正確構建了HCVNS3解旋酶及其突變型和表達缺陷質粒;(2)體外細胞轉染，HCVNS3解旋酶及其突變型表達質粒均可抑制轉染細胞的熒光素酶表達，HCV NS3解旋酶表達缺陷質粒同樣可抑制轉染細胞的熒光素酶活性;(3) RT-PCR檢測顯示，轉染細胞中質粒pCMVNCRLuc和轉染內參質粒pRL-TK mRNA的相對表達水平無顯著性差異;細胞中未檢測出IFN-β表達，PKR mRNA的相對表達水平無顯著性