通脈止血方對免疫性血小板減少性紫癜動物模型的實驗研究.pdf

1、目的：免疫性血小板減少性紫癜(ITP)是常見的小兒出血性疾病，以出血及外周血小板減少，骨髓巨核細胞正?；蛟龆嗖橛谐墒煺系K為主要表現(xiàn)。其發(fā)病原因尚未完全闡明。但越來越多的資料顯示，在ITP發(fā)病中，細胞免疫起了非常重要的作用。而運用中藥治療本病取得了滿意的療效，可以從根本上調節(jié)機體的免疫功能。 導師經過多年的臨床研究發(fā)現(xiàn)小兒ITP通常具有熱盛動血，迫血妄行的病機特點，同時“瘀血”這一病理機制貫穿于疾病始終，而且在運用寒涼藥物止血時

2、，應注意調氣與顧護脾胃，故主張以涼血祛瘀止血為主，佐以健脾益氣來治療本病，并自擬通脈止血方(三七、生地、茜草、丹皮、仙鶴草等)。本課題通過觀察通脈止血方對ITP小鼠的血小板、免疫器官、骨髓巨核細胞、T淋巴細胞亞群、紅細胞免疫系統(tǒng)的影響，探討通脈止血方對小兒免疫性血小板減少性紫癜的藥效及作用機理，為本方治療小兒ITP的臨床應用提供實驗依據。 方法：造模程序參照楊宇飛方法，首先制作豚鼠抗小鼠抗血小板血清(GP-APS)備用。然后選用

3、60只同批出生健康BALB/C雌性小鼠，用隨機法抽取12只作為正常組，其余作為實驗組。于1、3、5、7、9、11、13天，按照100μl/20g給實驗組小鼠腹腔注射1：8用生理鹽水稀釋的APS。反復注射APS使小鼠血小板在7天內維持原水平的11％～25％，即為成功模型。同時按照100μl/20g給正常組小鼠腹腔注射生理鹽水。除正常組外，造模第7天，取實驗組小鼠尾血，按照血小板計數隨機分為4組，即模型組、潑尼松組、通脈止血方小劑量組、通脈

4、止血方大劑量組，每組12只。在第1次注射APS后的第8天，模型組和正常組灌服蒸餾水，對照組灌服醋酸潑尼松(0.2mg/20g)，治療組灌服通脈止血方(小劑量組：0.424g生藥/20g；大劑量組：0.848g生藥/20g)，每日1次，連續(xù)給藥1周。最后一次給藥后禁食12小時，先取小鼠尾血進行血小板計數，然后摘眼球取血，制備血漿、血清，以進行T淋巴細胞亞群及紅細胞免疫功能測定。剖腹取出脾臟、胸腺、右側腎上腺，吸去血跡，稱重以計算臟器系數。

5、并取右側股骨骨髓，涂片進行骨髓巨核細胞計數及其分類觀察。 結果：1血小板計數的變化治療前，各實驗組血小板計數與正常組相比，均有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，但它們之間比較無顯著性差異(P＞0.05)。實驗結束后，與正常組比較，潑尼松組和大、小劑量組血小板計數無顯著性差異(P＞0.05)；與模型組相比，潑尼松組和大、小劑量組血小板數明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P＜0.001)；潑尼松組和大、小劑量組之間血小板計數兩兩比較無顯著性差異(

6、P＞0.05)。 2免疫器官系數的變化各實驗組脾臟均見不同程度增大，其中以模型組增大最為明顯，各組與正常組比較，均有顯著性差異(P＜0.001)；大劑量組與潑尼松組脾臟系數較模型組和小劑量組均有顯著性差異(P＜0.001)，而兩組之間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。除模型組外，其它各組胸腺系數較正常組無顯著性差異(P＞0.05)。各組小鼠腎上腺系數均無明顯異常，較正常組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 3骨髓巨核細胞總數

7、及其分類的影響各實驗組骨髓巨核細胞總數均有所增多。從各組巨核細胞分類所占百分比可以看出，正常組骨髓巨核細胞以產板型為主；模型組骨髓巨核細胞總數較正常組明顯增多，有顯著性差異(P＜0.001)，但以顆粒型為主；大劑量組骨髓巨核細胞總數接近正常(P＞0.05)，且以產板型為主；潑尼松組和小劑量組骨髓巨核細胞總數較正常組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，但以產板型為主；與模型組比較巨核細胞總數下降，有顯著差異(P＜0.001)。 4外周血

8、T淋巴細胞亞群的改變與正常組相比，模型組CD4+降低(P＜0.05)，CD8+明顯升高(P＜0.001)，CD4+/CD8+值明顯降低，有顯著性差異(P＜0.001)，可見ITP小鼠T淋巴細胞免疫功能低下；大劑量組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+與正常組相比，均無顯著性差異(P＞0.05)；大劑量組CD4+/CD8+與潑尼松組、小劑量組比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 5紅細胞免疫功能的影響與正常組相比，模型組、潑尼松

9、組和小劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR均明顯下降，有顯著性差異(P＜0.01)；大劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR升高，與正常組相比無顯著差異(P＞0.05)；大劑量組RBC-C3bRR和RBC-ICR與潑尼松組、模型組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。 結論：本實驗證明通脈止血方具有如下作用：(1)提升血小板數；(2)促使骨髓巨核細胞總數恢復，使產板巨核細胞數增加，并向成熟方向分化；(3)促使脾臟免疫功能恢復