小鼠近視動物模型網膜PAX6基因啟動子CpG島甲基化研究.pdf

1、目的:
　　1、研究C57BL/6小鼠形覺剝奪性近視動物模型視網膜PAX6基因mRNA水平的變化;
　　2、研究C57BL/6小鼠形覺剝奪性近視動物模型視網膜PAX6啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的變化。
　　方法:
　　1建立C57BL/6小鼠形覺剝奪性近視動物模型:21日齡C57BL/6小鼠36只，隨機分為4組，單眼形覺剝奪組:剝奪4周(n=12)，對側眼作為自身對照;形覺剝奪恢復組(n=12):單眼形覺剝奪4

2、周，恢復7天;正常對照組(n=12)。實驗前后分別用紅外偏心驗光儀測量小鼠眼球的屈光狀態(tài)，光學相干斷層掃描儀測量眼球生物學參數(shù)，包括眼前節(jié)、玻璃體腔深度和眼軸長度等。實驗結束后用光學顯微鏡對各組的視網膜組織進行取材，分別提取視網膜組織基因組RNA和DNA，用于后續(xù)實驗。
　　2 C57BL/6小鼠形覺剝奪性近視視網膜PAX6mRNA水平的變化:取單眼形覺剝奪4周、單眼遮蓋4周，恢復7天以及年齡相匹配的正常對照組C57BL/6小鼠各

3、6只。分離視網膜組織，實驗眼、對側眼、對照眼按隨機數(shù)字表，分別提取視網膜總RNA，逆轉錄為cDNA，realtime PCR檢測每組視網膜中PAX6的表達。在做檢測前考慮到視網膜不同時間點表達的差異性，用正常小鼠（另5周齡C57BL/6小鼠25只）檢測了不同時間點（8時、11時、14時、17時、20時五個時間點取材各5只小鼠）視網膜PAX6的表達情況，確定了統(tǒng)一的取材時間消除時間的干擾因素。
　　3 C57BL/6小鼠形覺剝奪性近

4、視視網膜PAX6啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的變化:取單眼形覺剝奪4周、單眼遮蓋4周，恢復7天以及年齡相匹配的正常對照組C57BL/6小鼠各6只。實驗眼、對側眼、對照眼按隨機數(shù)字表，分別提取視網膜總DNA，亞硫酸鹽修飾后用克隆測序的方法檢測不同處理眼視網膜組織PAX6啟動子區(qū)域Cp6島甲基化狀態(tài)。
　　統(tǒng)計學處理采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件，組內實驗眼對側眼比較采用配對t檢驗，不同組間比較采用獨立樣本t檢驗。
　　結果:<

5、br>　　1形覺剝奪4周后，同一小鼠的實驗眼相比其對側眼及對照組對照眼均向近視方向漂移且P＜0.05。
　　2形覺剝奪4周，形覺剝奪眼和正常對照眼相比PAX6 mRNA下降58％(P＜0.05)，剝奪眼和對側眼相比PAX6 mRNA水平下降了52％(P＜0.05)。去除眼罩7天后，PAX6 mRNA表達完全恢復。
　　4形覺剝奪4周，形覺剝奪眼和正常對照眼PAX6啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平未見明顯差異，剝奪眼和對側眼之間甲

6、基化水平也沒有明顯的統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　1小鼠單眼形覺剝奪4周可誘導出相對明顯的近視;利用相干光斷層掃描儀測量小鼠眼球生物學參數(shù)可以較好反映屈光度的改變;
　　2 C57BL/6小鼠近視模型視網膜形覺剝奪眼和正常對照眼及對側眼相比PAX6mRNA表達明顯下調。形覺剝奪恢復組實驗眼PAX6 mRNA表達恢復至正常水平。
　　3 C57BL/6小鼠近視模型，視網膜PAX6 mRNA表達量的改變與該基因啟動子