TC-1在肺癌組織中的表達和甲基化的意義研究.pdf

1、目的:
　　TC-1(thyroid cancer-1)是近年發(fā)現(xiàn)的由C8orf4基因編碼的核蛋白，它首先被發(fā)現(xiàn)在甲狀腺乳頭狀癌中表達，研究證實TC-1蛋白COOH端三個區(qū)域易形成緊密的螺旋結構，促進其與目的蛋白結合，調(diào)控信號傳導通路，進而影響細胞的生物學行為。已有研究證實，TC-1作為Wnt/β-catenin信號通路上游調(diào)節(jié)基因與β-catenin競爭結合cby(Chibby)，減輕cby對下游靶基因-如cyclinD1，MM

2、P-7，MMP-14，CD44，c-Met等的抑制作用，從而間接的增強Wnt/β-catenin信號通路介導的轉(zhuǎn)錄作用，增強腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　但是，TC-1在非小細胞肺癌中的表達與臨床病理因素及β-catenin的關系尚不明確，肺癌組織中TC-1的甲基化水平也未有研究。為了明確以上問題，我們檢測了NSCLC中TC-1的表達情況，分析了TC-1表達與臨床病理因素及β-catenin水平的關系，并進一步探討了TC-1的甲基化

3、水平與肺癌的惡性表型的關系。
　　方法:
　　1、組織標本來源
　　在中國醫(yī)科大學倫理委員會的批準下進行。100例肺癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤5cm)來自2008-2010年在中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院手術的病人，組織經(jīng)10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋。患者術前均未接受放化療，按國際抗癌聯(lián)盟的肺癌TNM分期標準。組織學診斷和分化程度根據(jù)世界衛(wèi)生組織分類標準進行判定。
　　2、免疫組織化學染色
　　組織經(jīng)10

4、％中性福爾馬林固定，石蠟包埋。將石蠟包埋的肺癌組織塊切成4μm厚切片。以PBS代替一抗作為空白對照。使用即用SP超敏免疫組化試劑盒（邁新，福州，中國）。兔抗人TC-1(1∶200)或鼠抗人β-catenin(1∶200)。兩位病理醫(yī)生對切片分別作出判定，每張組織切片隨機觀察5個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)100個癌細胞，陽性率根據(jù)陽性癌細胞所占百分比計算。TC-1和β-catenin表達主要位于細胞質(zhì)，也可在細胞核中表達。每個病例

5、的TC-1或β-catenin的陽性率1％-25％為1分、＞25％-50％為2分、50％-75％為3分、76％-100％為4分，染色強度分為0分（無著色）、1分（黃色）、2分（棕黃色）、3分（棕褐色）。陽性率與強度評分相乘:≤6分為低表達，≥8分為高表達。當＞10％的癌細胞胞核染色陽性時則該病例定義為核表達陽性。
　　3、DNA提取與亞硫酸鹽處理后測序(Bisulfite Sequencing PCR，BSP)
　　按照北京

6、白太克公司的組織/細胞DNA提取試劑盒說明書提取DNA。準確定量后，按照EZ DNA甲基化試劑盒(ZYMO)說明書進行DNA樣品甲基化修飾處理，獲得DNA產(chǎn)物進行PCR及測序。
　　4、統(tǒng)計分析
　　各組資料利用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析。P＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、TC-1蛋白表達的臨床意義。
　　TC-1在肺鱗癌和腺癌組織中表達明顯增加，其胞質(zhì)表達與肺癌的組織學類型(P＜0.0

7、01)、分化程度(P=0.028)及淋巴結轉(zhuǎn)移(P=0.002)顯著相關，其胞核表達與肺癌的分化程度相關，P=0.017。β-catenin在肺鱗癌和腺癌組織中的表達亦明顯增加，其胞質(zhì)表達與肺癌的組織學類型(P=0.001)、分化程度(P=0.009)及淋巴結轉(zhuǎn)移（P=0.013）有顯著關聯(lián)性，而其在胞核表達未見明顯關聯(lián)性。TC-1的細胞質(zhì)表達與β-catenin的胞質(zhì)表達呈顯著正相關(P＜0.001)，TC-1在肺癌中的細胞核表達也與

8、β-catenin的細胞核表達正相關(P=0.003)。
　　2、TC-1的甲基化水平與肺癌的惡性表型的關系。
　　BSP結果顯示在肺癌和癌旁正常肺組織中，94和105位點均為甲基化狀態(tài)，肺癌組織中，第49bp位點CpG的甲基化明顯低于癌旁正常肺組織(P=0.045)，其他位點未見明確相關性，肺癌組織中，第13位點的去甲基化與肺癌的淋巴結轉(zhuǎn)移相關（P=0.014），第41位點也有相似的趨勢，其他位點未見明確相關性