STAT4、T-bet和IL-2基因多態(tài)性與中國漢族人群哮喘的相關性研究.pdf

1、[研究背景]: 哮喘是由多種炎癥細胞(嗜酸性粒細胞、肥大細胞和T淋巴細胞)參與、由IgE介導的慢性炎癥性疾病，是一種由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的多基因遺傳病，主要表現為氣道高反應性、氣道阻塞、氣道炎癥和氣道重構。臨床以反復發(fā)作的咳嗽、喘鳴和呼吸困難為主要表現，可自愈或經藥物緩解。 近年來陸續(xù)報道哮喘發(fā)生與Th1、Th2細胞分化不平衡有關。STAT4(signaltransducerandactivatoroftrans

2、cription4)---T-bet(T-boxexpressedinTcells)途徑與STAT6---GATA3途徑分別被認為是Th1細胞與Th2細胞分化的兩種主要途徑。任何一條途徑出現異常都會導致，Th1/Th2細胞分化異常。已知Th2細胞的分化與哮喘發(fā)生密切相關，Th1方向分化減弱或者Th2方向分化增強都將導致免疫調節(jié)失常，引起哮喘。2005年，Park等在韓國人群中發(fā)現STAT4基因的單核苷酸多態(tài)(single nucleot

3、ide polymorphism，SNP)與哮喘相關，并認為STAT4是特異性IgE產生的遺傳學因素之一.T-bet是Th1分化的重要轉錄因子。Susetta等報道T-bet基因缺失的小鼠會發(fā)生哮喘。同時在2006年發(fā)現，T-bet基因多態(tài)位點與美國人群哮喘和氣道高反應性相關。2005年在日本人群中也發(fā)現，T-bet基因多態(tài)位點與藥物誘發(fā)的哮喘相關。IL-2位于4q27，包含4個外顯子，2006年，Ulla Christensen等首次

4、報道IL-2可作為哮喘的候選基因，并在丹麥人群中發(fā)現IL-2基因的兩個多態(tài)位點與介導過敏性疾病相關。上述遺傳學研究提示STAT4、T-bet和IL-2基因在不同人群中與哮喘和氣道高反應性有不同程度的相關性，但到目前為止，上述三個基因在中國漢族人群中與哮喘的相關性尚未見報道。 [研究目的]: 利用病例一對照方法探討STAT4、T-bet及IL-2基因的三個多態(tài)位點與中國漢族人群哮喘之間的相關性。這些多態(tài)位點分別是：STAT

5、4基因啟動子區(qū)域SNP位點-608 A>G，T-bet基因-1993T>C，IL-2基因啟動子區(qū)域-92 T>G。 [研究方法]: 1．哮喘組與對照組樣本收集：收集中國漢族哮喘患者及正常對照個體外周血樣，提取基因組DNA。收集的哮喘患者均符合支氣管哮喘的診斷標準；正常對照個體均無哮喘及其他過敏性疾病癥狀與病史，排除肝、腎疾病。 2．基因分型，基因型及等位基因頻率統(tǒng)計：用PCR-RFLP方法對STAT4基因-608

6、 A>G位點分型；用Tetra-primer ARMS-PCR方法對T-bet基因-1993T>C位點和IL2基因-92 T>G位點分型。根據瓊脂糖凝膠電泳結果確定個體基因型，計算各位點在哮喘組及對照組中的基因型頻率及等位基因頻率。 3．Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗：根據Hardy-Weinberg平衡定律計算各多態(tài)位點在哮喘組和對照組的預期基因型頻率，采用卡方檢驗進行組間比較。 4．基因型與等位基因分布差

7、異檢測：采用卡方檢驗比較各多態(tài)位點在哮喘組與對照組的基因型與等位基因頻率差異，檢驗多態(tài)位點與哮喘的相關性。 [結果] 1．STAT4基因多態(tài)位點-608A>G，在哮喘組中，A/A、A/G、G/G基因型頻率分別是0.536、0.377和0.086，在對照組中分別是0.515、0.399和0.086；等位基因A和G的頻率在哮喘組分別是0.725和0.275，在對照組分別是0.715和0.285，經x2檢驗p=0.889。

8、 2．T-bet基因多態(tài)位點-1993。T>C，哮喘組中，T/T、T/C、C/C基因型頻率分別是0.630、0.315、0.055，在對照組中分別是0.632、0.324、0.044；等位基因T和C的頻率在哮喘組分別是0.788、0.212，在對照組分別是0.794、0.206，經x2檢驗P=0.837。 3．IL-2基因多態(tài)位點-92 T>G，哮喘組中，T/T、T/G、G/G基因型頻率分別是0.344、0.511、0.14