耐藥上皮性卵巢癌細胞株(TOV112D-DDP)的Her2表達及其相關信號通路分析.pdf

1、目的：利用順鉑（cisplatin，DDP）構建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細胞株TOV112D/DDP，并通過蛋白免疫印跡和免疫熒光細胞化學技術檢測該耐藥癌細胞人表皮生長因子受體Her2（human epidermal growth factor receptor2）的表達情況和相關信號通路中信號轉導子和轉錄激活子-3（signal transducers and transcription activators3，STAT-3）的激活情況。

2、探討上皮性卵巢癌細胞的耐藥性與Her2基因表達及其相關信號通路激活的關系。為臨床耐藥性卵巢癌的治療奠定理論基礎。
　　方法：1.順鉑耐藥細胞的構建：采用微量遞增的方法，利用順鉑構建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細胞株（TOV112D/DDP）；2.順鉑耐藥細胞耐藥性的評價：MTT實驗檢測耐藥細胞株半數(shù)抑制率（half maximal inhibitory concentration of a substance，IC50），評價耐藥細胞株的

3、耐藥性；3.順鉑耐藥細胞中Her2的表達：利用蛋白免疫印跡（Western blot）和細胞免疫熒光組織化學技術（激光共聚焦掃描顯微鏡）檢測上皮性卵巢癌細胞株 TOV112D及順鉑耐藥細胞株 TOV112D/DDP中Her2的表達；4.順鉑耐藥細胞 TOV112D/DDP中 STAT3的表達和激活情況：利用Western blot和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測上皮性卵巢癌細胞株TOV112D及順鉑耐藥細胞株TOV112D/DDP中STAT3

4、、p-STAT3的表達水平及分布情況。
　　結果：1.成功構建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細胞 TOV112D/DDP，MTT檢測結果得到TOV112D/DDP細胞對順鉑的耐藥系數(shù)為4.1429；2.Western blot檢測結果顯示，與上皮性卵巢癌細胞TOV112D相比，耐藥細胞TOV112D/DDP Her2表達明顯上調，激光共聚焦掃描顯微鏡結果同樣顯示耐藥細胞Her2的表達明顯高于非耐藥細胞。3.Western blot結果顯示，

5、與TOV112D細胞相比，耐藥細胞TOV112D/DDP中stat3表達明顯上調。激光共聚焦掃描顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)，順鉑耐藥細胞TOV112D/DDP中的STAT3較上皮性卵巢癌細胞TOV112D中顯著上調，且順鉑耐藥細胞的細胞核中STAT3表達上調尤為顯著。4.激光共聚焦掃描顯微鏡檢測結果顯示，p-STAT3均主要表達于TOV112D和順鉑耐藥細胞TOV112D/DDP的細胞核中，Western blot和激光共聚焦掃描顯微鏡結果均表明T