伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病細胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細胞白血病的作用及機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蘇州大學博士學位論文伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病細胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細胞白血病的作用及機制姓名:楊東光申請學位級別:博士專業(yè):內(nèi)科血液學指導教師:張日20070401伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病細胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細胞白血病的作用及機制中文摘要結果:建立了伊馬替尼耐藥患者A B L K D 點突變的檢測方法。I M 耐藥的C M L患者A B L K D 總的點突變檢出率為4 5 .4 5 %。其中,血液學耐

2、藥患者A B L K D 點突變檢出率為5 7 .1 4 %。遺傳學耐藥患者A B L K D 點突變檢出率為2 5 %。共發(fā)現(xiàn)3 種點突變,G 2 5 0 E ( 2 例) 、E 2 5 5 K ( 1 例) 和T 3 1 5 I ( 2 例) 。血液學耐藥的患者,發(fā)現(xiàn)突變的時間最早為I M 治療后4 個月,最長為I M 治療后9 個月。遺傳學耐藥患者突變檢出時間是I M 治療后1 2 個月。所有患者I M 治療前均未檢出突變。結論:

3、發(fā)生I M 耐藥的C M L 患者,其B c r - A b l 融合基因A B L K D 存在著高頻率的點突變,且與I M 治療相關。通過對耐藥點突變情況進行早期檢測,有利于在發(fā)生耐藥前進行治療干預,為患者提供更有效的治療選擇。三、伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病細胞模型的建立目的:建立I M 耐藥的C M L 細胞模型。方法:將分別含有全長B c r - A b l 融合基因發(fā)生I M 耐藥的T 3 1 5 I 及E 2 5 5 K

4、 點突變的逆轉錄病毒載體M I G R l p 2 1 0 /T 3 1 5 1 及M I G R l p 2 1 0 /E 2 5 5 K 經(jīng)亞克隆、純化、P C R 鑒定后,采用逆轉錄病毒介導的細胞轉染技術分別轉染到到依賴細胞因子生長的髓系原始細胞3 2 D 細胞中,篩選出表達B c r - A b l 的細胞,然后用熒光顯微鏡及蛋白免疫印記等方法鑒定陽性克隆,并分離單個克隆。經(jīng)實時定量P C R ( r e a l t i m e

5、q u a n t i t a t i v eP C R , R Q .P C R ) 檢測各細胞株B c r - A b l 融合基因拷貝數(shù)。結果:成功建立了I M 耐藥的C M L 細胞模型3 2 D p 2 1 0 T 3 1 5 1 及3 2 D p 2 1 0 E 2 5 5 K ,兩細胞株B c r - A b l 融合基因拷貝數(shù)均較高,并表達B c r - A b l 融合蛋白。結論:建立了I M 耐藥的C M L 細胞模

6、型,為研究I M 耐藥的C M L 提供了新的有力工具。四、亞砷酸對伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病細胞模型的作用及機制目的:探討A T O 與I M 是否存在交叉耐藥現(xiàn)象以及A T O 對B e r - A b l 陽性細胞的作用是否存在靶向性,探討A T O 與I M 對I M 耐藥細胞株聯(lián)合應用的性質,探討A T O 對I M 耐藥的C M L 細胞株的作用及其作用機制。方法:采用四氮唑藍( m e t h y l .t h i a

7、 z 0 1 .t e t r a z o l i u m ,M T T ) 法測定I M 、A T O 單獨及聯(lián)合應用于3 2 D /M I G 、3 2 D /p 2 1 0 、3 2 D /p 2 1 0 T 3 1 5 1 及3 2 D /p 2 1 0 E 2 5 5 K 的I C 5 0 。測定伊馬替尼、亞砷酸單獨及聯(lián)合應用- 于3 2 D /p 2 1 0 , Z f l t .3 2 D /p 2 1 0 E 2 5 5

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