重組腺病毒載體轉(zhuǎn)導的BDNF、GDNF在大鼠體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷和缺氧損傷模型中的保護作用.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文重組腺病毒載體轉(zhuǎn)導的BDNF、GDNF在大鼠體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷和缺氧損傷模型中的保護作用姓名：吳偉申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：程焱2002.5.1中文摘要 天津醫(yī)科大學博士論文周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及維持整個個體神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能正常所必需一組內(nèi)源性可溶性蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)這類因子不僅可以促進正常神經(jīng)元的分化和生長，對一些應激狀態(tài)也有明顯的保護性作用，特別是對于缺血性腦血管病它們可以發(fā)揮重要的

2、保護性作用。但是關(guān)于這類物質(zhì)具體的作用機制目前尚不完全明7 ，尤其是與細胞凋亡關(guān)系的問題在某些方面還有一些分歧。、／ 因I 峨們設(shè)計如下實驗：( 1 ) 以腺病毒為載體轉(zhuǎn)導B D N F 、G D N F ：( 2 )●利用體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元觀察谷氨酸損傷模型和缺氧損傷模型的作用及其與凋亡的關(guān)系( 3 ) 觀察重組腺病毒對體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元感染情況及重組腺病毒轉(zhuǎn)導的B D N F 、G D N F 蛋白表達情況。( 4 ) 觀察重組腺

3、病毒轉(zhuǎn)導的B D N F 、G D N F 對正常生長海馬神經(jīng)元細胞凋亡的影響及對谷氨酸損傷和缺氧損傷細胞凋亡和b c l 一2 蛋白表達的影響。實驗中主要包括免疫組化、原位凋亡檢測、W e s t e r nB l o t t i n g 檢測等實驗方法。通過觀察腺病毒轉(zhuǎn)導的B D N F 年I JG D N F 在兩種損傷模型中所起的作用，我們得出以下結(jié)果：外源性加入谷氨酸和去除培養(yǎng)液中的氧氣能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元出現(xiàn)明顯損傷，細

4、胞存活率明顯下降同時細胞形態(tài)學也出現(xiàn)明顯變化，如部分細胞水腫、死亡等；重組腺病毒對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的感染率能達虱J 3 0 ％左右，而且W e s t e r nB l o t t i n g 實驗結(jié)果表明目的蛋白也能被有效表達；腺病毒轉(zhuǎn)導的B D N F 、G D N F 能使體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元谷氨酸和缺氧損傷細胞凋亡明顯減少，并能使b c l 一2 蛋白表達升高b ＼根據(jù)以上結(jié)果我們得出以下結(jié)論：1 ．體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元仍保持神