胎肝Sca-1~+細(xì)胞的橫向分化和應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的 探討胎肝Sca-1+細(xì)胞橫向分化的能力、特點(diǎn)和在腎損傷修復(fù)中的作用。方法取14.5天C57BL/6j小鼠的胎肝,制成單細(xì)胞懸液；用快速PCR方法鑒定細(xì)胞的性別；收集雄性細(xì)胞,用MACS(magnetic cell sorting)技術(shù)分離雄性胎肝Sca-1+(Stem Cell Antigen-1)細(xì)胞；用同樣方法分離骨髓Sca-1+細(xì)胞；將2×104的雄性胎肝Sca-1+細(xì)胞移植給受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠；2~6月后

2、取受體小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織,制作3-5μm石蠟切片；用原位雜交技術(shù)追蹤Y染色體來(lái)確定細(xì)胞的來(lái)源,同時(shí)用特異性組織化學(xué)技術(shù)顯示組織特征。為了研究胎肝Sca-1+細(xì)胞修復(fù)能力,用甘油誘導(dǎo)小鼠急性腎功能衰竭(acute renal failure.ARF)的模型；3h后,腹膜下注射10μg/kg的G-CSF連續(xù)5天,監(jiān)測(cè)血清肌酐和尿素氮水平以及腎組織病理形態(tài)。為了消除內(nèi)源雌性干細(xì)胞的作用,用致死量射線清除小鼠體內(nèi)造血干細(xì)胞,移植雄性

3、胎肝Sca-1+細(xì)胞,8周后雌性小鼠骨髓變?yōu)樾坌怨撬?；用甘油誘導(dǎo)小鼠急性腎功能衰竭,72h后再次輸入2×104雄性胎肝Sca-1+細(xì)胞,8周后制取受體腎組織切片。用原位雜交技術(shù)追蹤Y染色體來(lái)確定細(xì)胞的來(lái)源,并計(jì)算橫向分化的頻率。最后,比較了胎肝和骨髓的Sca-1+細(xì)胞向。腎組織細(xì)胞分化的頻率。
　　結(jié)果 在移植雄性胎肝Sca-1+細(xì)胞的雌性小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織切片中出現(xiàn)雄性細(xì)胞,各組織雄性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為(4.5±0.

4、5)%、(0.9±0.1)%、(1.9±0.6)%、(6.1±0.5)%和(7.61±2.3)%,呈現(xiàn)小腸>胃>腎>肺>肝的特征；腎組織切片中的雄性細(xì)胞分別為RCA+、CYP1A2+、Vimentin+、CD45-和F4/80-；急性腎損傷使雌性受體小鼠腎組織中的雄性細(xì)胞數(shù)增加(8.58±1.34)%,在腎小管周?chē)霈F(xiàn)成對(duì)排列的雄性細(xì)胞；雄性胎肝Sca-1+細(xì)胞輸注使急性腎組織損傷雌性受體小鼠腎臟組織中的雄性細(xì)胞增多(18.13±1.9