14760.紅色熒光蛋白mcherry中插入外源短肽位點的研究

1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonSitesoftheToleratePeptideInsertionintheFluorescentProteinofmCherryByJuntingLiangSupervisor：ProfZhenJiaoBiophysics●PhysicalEngineeringCollegeMa

2、y2013摘要摘要自熒光蛋白問世以來，研究人員已從生物體內分離出多種熒光蛋白及在此基礎上利用分子生物學技術進化出幾乎覆蓋整個熒光光譜的突變體，并廣泛應用到分子生物學，細胞生物學，生物醫(yī)學等各個領域。同時，熒光蛋白的研究與熒光顯微技術、流式細胞術等技術相結合產生諸如FRET(熒光能量共振轉移技術)，BiFC(雙分子熒光互補技術)，光漂白技術，熒光蛋白標簽，熒光蛋白傳感器，熒光計時器等新技術，使熒光蛋白成為生物學研究領域中不可或缺的工具之一

3、。本研究采用噬菌體Mu轉座子突變系統(tǒng)將外源基因隨機插入到熒光蛋白mCherry中，然后利用流式細胞分選技術，成功篩選出13個mCherry突變體。流式篩選得到的13個突變體其外源短肽插入位置不同，分別位于mCherry氨基酸序列的第K9，E10，F(xiàn)11，F(xiàn)65，G90，G116，K121，E148，M150，L157，G171，V187，T223氨基酸殘基位置處，分別命名為m9，m10，m11，m65，m90，m116，m121，m14

4、8，m150，m157，m171，m187，m223。這些mCherry突變體經波長為587hi／1激發(fā)光照射，仍然發(fā)出較弱的紅色熒光，但熒光強度各異。mCherry突變體中短肽插入位點分布不同，導致其熒光強度相差甚大。其中插入位點在蛋白C／N端附近的突變體如m9，m10，ml1，m223熒光強度最亮；插入位點分布在熒光蛋白Loop結構內的突變體如m90，ml16，m171，m187熒光較亮；分布在6折疊柱上的突變體m121，m148，