穿梭質(zhì)粒pSP189-哺乳動物Vero細胞誘變檢測系統(tǒng)的研究及應(yīng)用.pdf

1、該研究將基于SV40病毒的短暫復制型穿梭質(zhì)粒pSP189與非洲綠猴腎Vero細胞組成穿梭質(zhì)粒/哺乳動物細胞誘變檢測系統(tǒng),并將該系統(tǒng)應(yīng)用于獸藥喹乙醇和喹烯酮的誘變性檢測.該研究經(jīng)陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pSP189質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Vero細胞后,回收質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌,獲得每皿多于50個的轉(zhuǎn)化子和1.9×10<'-4>的自發(fā)突變頻率,試驗結(jié)果表明該系統(tǒng)符合穿梭質(zhì)粒誘變測試系統(tǒng)的要求.該研究用已知的直接陽性誘變物MNNG和間接陽性誘變物B(α)P分別對已建

2、立的系統(tǒng)進行了驗證,試驗結(jié)果表明,MNNG以0.32μg·ml<'-1>的劑量誘發(fā)的突變頻率較溶劑對照組高10.5倍,而B(α)P以1.1μg·ml<'-1>的劑量誘發(fā)突變頻率較溶劑對照組高12倍,上述試驗結(jié)果表明,已建立的系統(tǒng)檢測已知陽性誘變物結(jié)果明顯,該系統(tǒng)可用于誘變檢測.質(zhì)粒經(jīng)6.6μg·m1<'-1>的喹乙醇處理后,轉(zhuǎn)染Vero細胞,并從細胞中回收質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliMBM7070,試驗結(jié)果表明,喹乙醇處理組的突變頻率明顯高于溶

3、劑對照組.該研究又對突變子質(zhì)粒靶基因進行序列測定,發(fā)現(xiàn)喹乙醇引起質(zhì)粒靶基因核苷酸序列改變主要表現(xiàn)為點突變和連續(xù)缺失,且以引發(fā)點突變?yōu)橹?質(zhì)粒經(jīng)1.90、3.75、7.5、15、30μg·ml<'-1>的喹烯酮處理后,將其轉(zhuǎn)染Vero細胞,回收并轉(zhuǎn)化E.coli MBM7070,試驗結(jié)果表明,喹烯酮處理組的突變子數(shù)較溶劑對照沒有明顯的增加;試驗又采用S<,9>將相同濃度的喹烯酮代謝活化后處理質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染Vero細胞,經(jīng)回收并轉(zhuǎn)化E.coli