27249.外源基因在集胞藻6803中高效表達及調控的研究

1、華東師范大學博士學位論文外源基因在集胞藻6803中高效表達及調控的研究姓名：魏蘭珍申請學位級別：博士專業(yè)：植物學指導教師：王全喜20100301摘要低濃度的C02也可以明顯增強外源P妨基因的表達。(3)通過基因芯片數(shù)據(jù)和生物信息學的分析，初步確定ndhCKJ操縱子可能的啟動子區(qū)域，并插入到P0載體報告基因的上游區(qū)域，轉化集胞藻6803，獲得轉基因株系P330。通過蛋白免疫印跡，研究不同生長時期、不同高光誘導時間以及二氧化碳濃度下轉基因株

2、系中外源基因的表達情況。結果表明，該未知啟動子在高光誘導4小時，低二氧化碳培養(yǎng)條件下，使外源egfp基因的表達水平達到最高。通過比較Pg—s與P330藻株中外源基因的表達情況，揭示ndhCKJ操縱子可能的肩動予區(qū)域對外源基因的啟動效果更為顯著；P330藻株中外源基因的表達水平比Pgs藻株提高42倍，比P0藻株提高82倍；蛋白定量結果表明，在轉基因P330藻株中，外源egfp基因的表達量可達總蛋白的I725％。本研究在構建同源重組雙交換平

3、臺的基礎上，分析來源于聚球藻7942的groESL基因啟動子、聚球藻7002的印筇基因啟動子、SD序列以及集胞藻6803自身ndhCKJ操縱子可能的啟動子區(qū)域對集胞藻6803中外源基因表達水平的影響。蛋白免疫印跡結果表明，這些調控元件均在一定程度提高了集胞藻6803中外源基因的表達效率，其中，ndhCKJ操縱子可能的啟動子區(qū)域對外源基因表達水平的提高幅度最大。以上結果為最終解決藍藻細胞這一新型宿主系統(tǒng)中外源基因表達效率低下的問題注入了新