圈卷產(chǎn)色鏈霉菌尼可霉素生物合成相關基因的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國農業(yè)大學博士學位論文圈卷產(chǎn)色鏈霉菌尼可霉素生物合成相關基因的研究姓名：曾洪梅申請學位級別：博士專業(yè)：微生物學指導教師：李季倫譚華榮2002.4.1中回衣業(yè)夫學博士學位論丈(20021Itlg產(chǎn)色鏈霉菌璺可寰絲金些塑墨墨墮塑竺墨采Hj常規(guī)轉化方法用來自天藍色鏈霉菌兒501的質粒pUCll69(DMT660：：Tn4556：：vph)多次轉化尼可霉素產(chǎn)生菌圈卷產(chǎn)色鏈霉菌野生型7loonq原qi質體，均未得到轉化子。采用限制性熱衰減法于5

2、0。C，30min溶菌制備7100的原生質體，獲得了轉化子，但轉化頻率極低，只有04個轉化子／lagDNA。川來自7j00的pUCll69再轉化不含pUCll69的7】00原生質體，轉化頻率提l島103～104倍。于39。C，MM／Vio條件下培養(yǎng)攜帶有pUCll69的7100孢子，Tn4560發(fā)生轉座；篩選到4068個轉座菌落，并從中得到8株尼可霉素阻斷突變株：對這8株突變株的總DNA進行Southern雜交分析表明，Tn4560至少

3、在4個不同的位點插入到7100的染色體上。用實驗室已獲得的與尼可霉素生物合成有關的覆蓋30kb的4段DNA片段為探針和經(jīng)不同酶切的8株突變株的總DNA進行Southern雜交，結果表明，除阻斷突變株Nik5有雜交信號且雜交信號大小均同野生型7100外，其余7株突變株均無任何雜交信號。HPLC分析表明，8株突變株在產(chǎn)生尼可霉素方面可分為兩種類型，Nik5為1種類型，其余7株為另一種類型。初步推測這7株突變株基因組DNA與尼可霉素生物合成有

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