Bt cry3Aa基因表達載體的構建及農桿菌介導的甘薯莖段遺傳轉化.pdf

1、甘薯（Ipomoea batatas Lam.）是世界上重要的農作物和工業(yè)作物，又兼具抗癌、保健的功效，因此在全世界廣泛種植。甘薯害蟲種類多樣，危害方式不盡相同，每年因害蟲造成甘薯減產給國家?guī)淼膿p失無法估計。而常規(guī)的甘薯品種缺乏對田間害蟲的天然抗性，依靠常規(guī)育種手段也難以解決上述問題。目前控制甘薯害蟲的手段多以化學殺蟲劑為主，既提高了生產成本又對環(huán)境產生污染，并且化學物質的殘留會對食用者造成安全隱患。因此，亟需發(fā)現(xiàn)并利用一種新型的手段

2、來培育甘薯抗蟲新品種。Bt基因被認為是一種針對害蟲有特異性殺蟲活性，而對人、畜等非目標生物無害的抗蟲基因，因其優(yōu)良的特性，目前在世界范圍內廣泛應用。Bt cry3Aa基因對鞘翅目昆蟲有專一殺滅活性，將該基因導入到甘薯中，培育并獲得轉基因甘薯可以對鞘翅目害蟲甘薯小象甲產生一定抵抗作用，以達到抗蟲并增加甘薯產量的目標。
　　本研究的主要結果是:
　　1.Bt cry3Aa基因序列的上游5'端引入了KpnⅠ、BamHⅠ限制性內切酶

3、酶切位點和PTD接頭，在下游3'端引入了SalⅠ酶切位點，且利用甘薯密碼子偏好性對cry3Aa進行改造后于公司合成。
　　2.合成后的基因經酶切、連接、轉化等步驟最終獲得雙元表達載體pCAMBIA1301-cry3Aa與pCAMBIA1301-PTD-cry3Aa。
　　3.通過農桿菌介導的不經植物組織培養(yǎng)階段的甘薯遺傳轉化體系的探索，初步建立了一種適合廣薯87號甘薯品種的轉化策略，在菌液OD600=0.4，侵染時間10mi