番茄SR-CAMTA轉錄因子家族基因SlSR4的克隆與功能研究.pdf

1、SR/CAMTA蛋白家族是真核生物界普遍存在的一類轉錄因子，在生物體生長發(fā)育調控過程中行使重要的功能。SR/CAMTAs蛋白有多個預測的功能域，且以一個相似的順序排列。此外，他們還擁有一個新穎的序列特異性DNA結合域（CG-1），這個DNA結合域不僅能夠直接與DNA結合激活轉錄，還可以與其他的轉錄因子相互作用而作為一個輔助激活子來激活轉錄。SR/CAMTAs基因在生物體內的功能呈現多樣化，不僅能夠調節(jié)生物體對外部刺激的響應、控制生長和細

2、胞增殖，還可能在情景記憶、抑癌因子方面發(fā)揮重要功能。目前在番茄中已經分離出7個SR/CAMTAs基因成員，但他們的功能并不非常明確。本研究選取了與其他6個同源性較低的SlSR4基因作為研究對象，進行了進一步的研究工作。
　　采用Real-timePCR技術分析了SlSR4基因在番茄各組織的表達水平，SlSR4基因在AC++各組織中呈現廣譜性的表達，其中Fl（花）中表達最高，果實時期表達水平相對較低；在突變體Nr、rin的果實中，S

3、lSR4基因也有不同程度的表達。
　　采用Real-timePCR技術分析了SlSR4基因在番茄幼苗脫水、傷害、冷、鹽脅迫處理下的表達水平。結果顯示，SlSR4基因在脫水、傷害、冷和鹽四種處理條件下均有不同程度的響應，但在鹽處理下響應最明顯。這表明：SlSR4基因很可能在這些非生物脅迫的信號途徑中行使重要的功能。
　　采用Real-timePCR技術分析了SlSR4基因在番茄幼苗在GA、ABA、ACC、Meja、IAA和SA

4、六種激素處理下的表達水平。結果表明：SlSR4基因對ABA的誘導并不敏感，對ACC和MeJA有輕微的響應，對GA、IAA和SA有較明顯的響應。
　　我們構建了SlSR4基因的RNAi沉默載體，通過農桿菌介導的遺傳轉化技術獲得了葉片中沉默效率較好的轉基因番茄株系。采用Real-timePCR技術分析了番茄果實B+4時期幾個果壁代謝相關基因的表達，結果發(fā)現，SlSR4基因沉默導致PG、PE1、CEL基因的表達上調，且降低了番茄果實的耐

5、貯性。此外，SlSR4基因在果實中的沉默效率遠低于葉片。
　　我們利用T1代轉基因幼苗進行了鹽脅迫實驗，結果表明：SlSR4基因沉默影響了轉基因幼苗下胚軸的生長，降低了對鹽脅迫的耐受性，還抑制了脅迫相關基因的表達。
　　我們在轉基因番茄中檢測了其他6個SR/CAMTA家族基因的表達水平，結果顯示：在轉基因番茄B+4果實中SlSR2、SlSR2L、SlSR3和SlSR3L的表達有輕微上調，SlSR1和SlSR1L沒有明顯變化；