仔豬早期斷奶應(yīng)激誘導(dǎo)肝臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬早期斷奶是提高母豬生產(chǎn)力的關(guān)鍵技術(shù)之一，但早期斷奶措施會(huì)對(duì)仔豬生理和心理產(chǎn)生影響，進(jìn)而導(dǎo)致早期斷奶應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞中蛋白質(zhì)加工和Ca2+貯存的主要場(chǎng)所，對(duì)應(yīng)激原的刺激十分敏感，當(dāng)各種應(yīng)激原作用于細(xì)胞時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)于增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)損傷的抵抗及適應(yīng)能力具有重要意義。因此，仔豬早期斷奶應(yīng)激是否會(huì)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在早期斷奶應(yīng)激過程中的作用還有待進(jìn)一步的研究。
　　本試驗(yàn)內(nèi)容主要包

2、括以下三個(gè)部分:1.研究仔豬早期斷奶應(yīng)激是否會(huì)誘導(dǎo)肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生;2.研究HepG2細(xì)胞在不同營(yíng)養(yǎng)素缺失培養(yǎng)條件下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生及其營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié);3.用不同亮氨酸添加水平(亮氨酸含量分別為1.66％、2.1％和2.44％)日糧飼喂早期斷奶仔豬，研究亮氨酸對(duì)仔豬早期斷奶應(yīng)激誘導(dǎo)的肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用。
　　本研究結(jié)果顯示:1.運(yùn)用透射電鏡觀察14日齡開始斷奶的大白豬仔豬肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)時(shí)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組（未斷奶仔豬）相比，早期斷奶

3、仔豬在15日齡時(shí)肝臟內(nèi)開始有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張現(xiàn)象，在16日齡時(shí)肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張程度加深;運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，早期斷奶仔豬在15日齡時(shí)，肝臟細(xì)胞核中未折疊蛋白反應(yīng)關(guān)鍵蛋白XBP1的表達(dá)量升高(P＜0.05)，在18日齡時(shí)，肝臟細(xì)胞核內(nèi)XBP1表達(dá)量升高(P＞0.05)，表明早期斷奶仔豬肝臟中發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;2.運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)EBSS、低葡萄糖、無(wú)葡萄糖、無(wú)亮氨酸和無(wú)氨基酸培養(yǎng)基處理后的H

4、epG2細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，EBSS處理能使細(xì)胞核內(nèi)的ATF4表達(dá)量顯著升高(P＜0.05);低葡糖糖處理時(shí)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的ATF4表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，細(xì)胞核內(nèi)的ATF4表達(dá)量極顯著升高(P＜0.01);無(wú)葡萄糖處理的HepG2細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中ATF4均顯著升高(P＜0.05)，細(xì)胞質(zhì)中的ATF6α和CHOP表達(dá)量也顯著升高(P＜0.05);無(wú)亮氨酸處理時(shí)，細(xì)胞質(zhì)中XBP1的表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)，

5、CHOP的表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，細(xì)胞核中ATF4和ATF6α的表達(dá)量也顯著升高(P＜0.05);無(wú)氨基酸處理時(shí)細(xì)胞質(zhì)中的CHOP表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，細(xì)胞核中的ATF4表達(dá)量也顯著升高(P＜0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明以上五種處理都會(huì)使HepG2細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活未折疊蛋白反應(yīng)。且無(wú)亮氨酸培養(yǎng)基處理細(xì)胞2h時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF4（細(xì)胞質(zhì)中）、ATF6α（細(xì)胞核中）和XBP1（細(xì)胞核中）表達(dá)水平較對(duì)照組升高（

6、P＜0.01），無(wú)亮氨酸培養(yǎng)基處理細(xì)胞4h時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)水平較處理2h組下降(P＞0.05)。3.HepG2細(xì)胞經(jīng)亮氨酸饑餓后重新補(bǔ)充亮氨酸，用Western blot檢測(cè)ATF4和ATF6α的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充亮氨酸（其終濃度為10mM）后，細(xì)胞核中ATF4和ATF6α的表達(dá)量均下降（P＜0.05），表明細(xì)胞中因亮氨酸缺失誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有所緩解;用不同亮氨酸水平日糧飼喂仔豬后，Western blot檢測(cè)其肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)