褐飛虱類酵母共生菌不同抗性菌株的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本文在測定褐飛虱類酵母共生菌不同抗性菌株對不同濃度吡蟲啉的敏感性的基礎(chǔ)上，通過篩選褐飛虱類酵母共生菌菌體蛋白質(zhì)的最佳提取方法，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了褐飛虱類酵母共生菌在吡蟲啉脅迫下的蛋白質(zhì)表達譜變化以及差異蛋白質(zhì)的功能分析，并推測出類酵母共生菌在褐飛虱對吡蟲啉抗性發(fā)展過程中的作用機制。其研究結(jié)果如下:
　　(1)通過比較褐飛虱類酵母共生菌不同抗性菌株在含不同濃度(500mg/L、1000mg/L、2000mg/L)吡蟲啉的固體培

2、養(yǎng)基上的菌落數(shù)和液體培養(yǎng)基中的生長量差異，發(fā)現(xiàn)馴化后的抗性菌株在長期低溫保存中對吡蟲啉的抗性有所下降，但仍保持較高抗性水平。確定了28℃，180r/min下培養(yǎng)72h方能收集到適量的不同抗性菌株的菌絲體，可用于蛋白質(zhì)提取和雙向電泳分析。
　　(2)在明確超聲波破碎法是褐飛虱類酵母共生菌菌體蛋白質(zhì)最佳提取方法的基礎(chǔ)上，利用2-D電泳和圖像分析方法研究了褐飛虱類酵母共生菌抗吡蟲啉菌株和敏感菌株在吡蟲啉脅迫下的蛋白表達譜。結(jié)果表明，敏感

3、菌株與其500mg/L吡蟲啉處理菌株相匹配的蛋白點為1063個，有150個顯著性差異蛋白點。敏感菌株與抗性菌株相匹配的蛋白點為1142個，有33個顯著性差異蛋白點?？剐跃昱c其500mg/L吡蟲啉處理菌株相匹配的蛋白點為987個，有134個顯著性差異蛋白點?？剐跃昱c其2000mg/L吡蟲啉處理的菌株相匹配的蛋白點為1079個，有97個顯著性差異蛋白點。研究結(jié)果闡明了褐飛虱類酵母共生菌在吡蟲啉脅迫下的蛋白質(zhì)表達譜及其變化規(guī)律。
　

4、　(3)采用膠內(nèi)酶解、質(zhì)譜技術(shù)及網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫鑒定了表達量差異2倍以上的蛋白點70個，其中55個蛋白點成功鑒定。利用國際蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，預(yù)測這些蛋白質(zhì)的可能功能，涉及到合成與代謝、細胞抗逆與防御、信號傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄和翻譯、膜及運輸、調(diào)控作用、解毒作用及未知功能蛋白等功能類別。經(jīng)過分析推測出褐飛虱共生菌中與抗藥性相關(guān)的蛋白質(zhì)可能有細胞色素P450、乙酰輔酶A脫氫酶和細胞色素C過氧化物酶等。研究結(jié)果為進一步分析基因功能，篩選與殺蟲劑解毒/降解相關(guān)的關(guān)