炭疽桿菌GNMT和GalE蛋白表達、純化和結晶研究.pdf

1、炭疽屬于造成死亡率很高的一類急性的人畜共患傳染病。炭疽桿菌常常被用作生化武器，對人類生存和生命安全存在威脅，因此炭疽桿菌的研究仍然是當今世界面臨的一項重要課題。
　　甘氨酸甲基轉移酶（GNMT, EC2.1.1.20）是一種在自然界原核和真核生物中都豐富存在的酶，是氨基酸代謝途徑中的關鍵酶，能催化甘氨酸引入甲基轉化為肌氨酸，并調控機體內s-腺苷高半胱氨酸和肌氨酸的比率，在生物體內發(fā)揮著重要的作用；目前為止，甘氨酸甲基轉移酶的晶體結

2、構只有人和鼠的被解析出來，對其他物種的GNMT結構還不了解不足，因此對炭疽桿菌的該酶晶體結構進行研究，能夠使我們更全面、更深入的了解該酶的功能和作用機制，為藥物設計等應用提供基礎。
　　UDP-半乳糖-4-差向異構酶(GalE, EC5.1.3.2)是生命體內另一具重要功能的酶，同樣廣泛分布于各種各樣的生物體內，它是葡萄糖與半乳糖之間轉化的樞紐，在半乳糖的代謝中其著至關重要的作用；目前，GalE晶體結構已經(jīng)通過從人、大腸桿菌、布氏

3、錐蟲等物種該酶蛋白組研究中獲得，為人類揭開該酶功能和結構機理提供了鑰匙，但是，不同的物種因其生存環(huán)境不同和自然的選擇作用，其GalE結構存在或多或少差異，炭疽桿菌被人類看作一類高致病菌，研究其GalE結構并功能特點，可以使我們更加深入了解其功能發(fā)揮原理，為藥物之新創(chuàng)和疾病之診預提供方向。
　　本文根據(jù)KEGG(the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)Database中炭疽桿菌GNMT

4、基因序列(登錄號為BAS3318)和GalE基因序列（登錄號為BAS1093），設計特異引物克隆獲得其序列，其序列全長分別為1356 bp和846 bp，然后通過限制性內切酶雙酶切后分別連接到表達載體pET-21a和pET-15b上，經(jīng)過質粒PCR、雙酶切及測序鑒定，篩選出陽性表達質粒，轉化至大腸桿菌BL21（DE3）表達宿主菌成功構建了表達GNMT基因和GalE基因的重組載體工程菌，然后將其在IPTG誘導下進行表達，用鎳親和層析、Mo