黃花蒿種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、黃花蒿（Artemisia annua L.）別名青蒿，為中醫(yī)傳統(tǒng)用藥。其有效成分青蒿素是目前治療惡性瘧疾唯一的真正有效藥物。我國(guó)青蒿素的生產(chǎn)主要靠野生資源，但現(xiàn)有野生資源遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足市場(chǎng)對(duì)青蒿素用藥不斷增長(zhǎng)的需求。本研究以黃花蒿為研究對(duì)象，采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)黃花蒿野生種群及其子代的遺傳多樣性水平和群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)和比較，闡明其遺傳變異的水平、空間上的分布特征和遺傳的穩(wěn)定性。同時(shí)，結(jié)合各種質(zhì)的有效成分，對(duì)黃花蒿種質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)

2、價(jià)，為尋找黃花蒿優(yōu)良種質(zhì)資源提供參考依據(jù)，為黃花蒿的良種選育和開(kāi)發(fā)利用提供理論參考。研究結(jié)果如下:
　　 1、利用正交設(shè)計(jì)和單因素試驗(yàn)相結(jié)合的方法，對(duì)黃花蒿ISSR-PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，確立黃花蒿最佳反應(yīng)體系，即25μL的體系中含dNTPs0.20mmol/L，引物0.80μmol/L，Mg2+1.60mmol/L，Taq DNA聚合酶1.00U，模板DNA80.00ng，10×Buffer2.50μL。最佳反應(yīng)程序?yàn)?94

3、℃預(yù)變性5min;94℃變性30s，50.0～57.8℃退火45s，72℃延伸1.5min，38個(gè)循環(huán);72℃再延伸7min;4℃保存。
　　 2、采用篩選的13條引物對(duì)13個(gè)黃花蒿野生種群進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增。野生種群共擴(kuò)增出117條帶，其中多態(tài)位點(diǎn)107個(gè)，物種水平多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPL)為91.45％，種群水平多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPL)平均值為69.62％，Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.3316，Shannon信息

4、指數(shù)(I)為0.4999，說(shuō)明野生黃花蒿具有較高的遺傳多樣性水平，遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.1749，遺傳變異有82.51％發(fā)生在種群內(nèi)的不同個(gè)體間，17.49％發(fā)生在不同種群間，基因流(Nm)為2.3585。廣西玉林(YL)和浙江杭州(HZ)野生種群的遺傳多樣性水平較高，應(yīng)作為重點(diǎn)保護(hù)種群;在建立種質(zhì)圃時(shí)應(yīng)盡量多采集植物個(gè)體進(jìn)行保存。
　　 3、通過(guò)對(duì)黃花蒿野生種群的地理距離和遺傳距離進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明二者沒(méi)有顯著相關(guān)

5、性。另外，黃花蒿野生種群的青蒿素含量與遺傳距離的相關(guān)性也不顯著。
　　 4、與親代（野生種群）相比，黃花蒿子代種群的遺傳多樣性參數(shù)值低于其野生種群;河南鄭州(ZZ)和廣東英德(YD)種群親、子代間的差異小，遺傳穩(wěn)定性較好，但其青蒿素含量遠(yuǎn)未達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)要求。綜合遺傳穩(wěn)定性和青蒿素含量?jī)煞矫婵紤]，建議將廣西天峨種群(TE)作為人工栽培采種的優(yōu)良種群。
　　 5、13個(gè)黃花蒿野生種群種質(zhì)材料可聚為兩大類(lèi)群:廣西北海種群(B