T-2毒素誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)變化的規(guī)律.pdf

1、飼料中T-2毒素污染情況嚴(yán)重,而T-2毒素可通過(guò)抑制DNA和RNA的合成,阻斷翻譯的啟動(dòng)來(lái)抑制蛋白質(zhì)的合成,T-2毒素在對(duì)蝦體內(nèi)蓄積的過(guò)程也是肌肉品質(zhì)變化的過(guò)程,對(duì)蝦長(zhǎng)期暴露T-2毒素污染的飼料勢(shì)必造成品質(zhì)劣化。
　　本研究以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象,設(shè)定不同T-2毒素暴露劑量(0、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg·feed)的人工染毒飼料,提取染毒組和對(duì)照組的對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)分類(lèi)成分,以凱氏定氮法和考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定其含量,

2、采用 SDS-PAGE電泳分析可溶性蛋白質(zhì)構(gòu)成變化,并采用常規(guī)理化方法對(duì)肌動(dòng)球蛋白的ATPase活性、巰基含量和ATP感度進(jìn)行分析。結(jié)果表明T-2毒素對(duì)肌肉蛋白質(zhì)分類(lèi)成分影響顯著(p<0.05),高劑量組T-2毒素引起肌動(dòng)球蛋白降解,在水溶性蛋白中的42 kD條帶灰度與T-2毒素暴露劑量具有相關(guān)性,有望作為評(píng)價(jià)T-2毒素誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦肌肉品質(zhì)變化的潛在指示物。T-2毒素均對(duì)蛋白質(zhì)性質(zhì)有顯著性影響(p<0.05),而且隨T-2毒素暴露劑量

3、增加,Mg2+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性逐漸降低。因此Mg2+相關(guān)的目標(biāo)酶,可作為評(píng)價(jià)T-2毒素誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)品質(zhì)變化的參考指標(biāo)。
　　本研究建立及優(yōu)化了凡納濱對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)雙向電泳分離技術(shù),結(jié)果表明:以液氮研磨+超聲破碎的提取方式,7M尿素和2M硫脲為主的裂解液提取凡納濱對(duì)蝦肌肉全蛋白,采用7 cm,pH4-7 IPG膠條,180μg被動(dòng)水化上樣,12.5％二向分離膠和膠體考染的方式,成功得到

4、分離度和分辨度較高的2-DE圖譜,為進(jìn)一步探索T-2毒素誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦肌肉品質(zhì)變化及篩選標(biāo)記蛋白奠定了基礎(chǔ)。
　　采用已建立的凡納濱對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)雙向電泳分離技術(shù)對(duì)不同劑量組凡納濱對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,得到30個(gè)差異蛋白,其中與T-2毒素相關(guān)的差異蛋白點(diǎn)12個(gè)。應(yīng)用激光解吸基質(zhì)輔助飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(MALDI-TOF/TOF)對(duì)12個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析得到其肽指紋圖譜和二級(jí)質(zhì)譜,通過(guò)MASCOT軟件搜索數(shù)據(jù)庫(kù)同已得到的肽

5、指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)分析,共鑒定出11個(gè)蛋白點(diǎn),1個(gè)未知蛋白,11個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的同源蛋白分別是小泛素樣修飾物-1(SUMO-1)、精氨酸激酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、抑制蛋白112、精氨酸激酶B鏈、70kD熱休克蛋白(部分)和卵黃蛋白原。12個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)量隨 T-2毒素暴露劑量增加均呈先上調(diào)后下調(diào)趨勢(shì),而其中編號(hào)2288差異蛋白點(diǎn)(精氨酸激酶)在暴露于T-2毒素低劑量時(shí)表達(dá)上調(diào),而暴露在中高劑量時(shí),蛋白點(diǎn)消失,說(shuō)明精氨酸激酶對(duì)中高劑量T-2毒素表現(xiàn)