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文檔簡介
1、泡沫病毒(foamy viruses,F(xiàn)V),在分類上屬于反轉錄病毒科泡沫病毒亞科泡沫病毒屬,為一類特殊的復雜反轉錄病毒。其基因組為二聚線狀單鏈RNA,基因組的結構組成與順序同典型的反轉錄病毒相似。前病毒兩端具有長末端重復序列(long terminal repeat, LTR),中間為結構基因gag、pol、env。與典型反轉錄病毒不同的是泡沫病毒在env與3'LTR之間存在內部啟動子(internal promoter,IP),負責
2、啟動下游非結構基因tas,bet等的轉錄。
牛泡沫病毒(bovine foamy virus,BFV)是該屬病毒的一員,在非靈長類泡沫病毒中研究的相對清楚。本室一直致力于對自主分離出的毒株BFV3026進行研究,證實BTas(BFV trans-activator of spumavirus)為BFV的反式激活因子,并對其展開功能研究。同時確證了BFV中存在Bet蛋白,證明其可抑制BTas對LTR和IP啟動子的反式激活。這
3、提示在病毒的調節(jié)機制中Bet蛋白可能發(fā)揮了一種負調控的作用。本文在前人研究的基礎上,進一步對BFV的兩種非結構蛋白Bet及BTas在病毒整體水平對其在病毒復制中所發(fā)揮的功能進行探索。
本文首先成功構建了Bet缺失的BFV3026感染性克隆pBS-BFV-△Bet,用其轉染293T細胞后與BFVL指示細胞系共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)該感染性克隆與野生型相比對LTR激活能力增強,進一步通過免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)Bet缺失的BFV3026感染性克隆與
4、野生型相比BTas蛋白及Gag蛋白的表達量均有增加。說明缺失Bet使得病毒滴度上升,證明在病毒水平Bet作為負調控因子影響了病毒的復制。隨后本文構建了Bet穩(wěn)定表達細胞系Cf2Th-Bet,進一步對Bet蛋白的功能展開研究,本文發(fā)現(xiàn)在Cf2Th-Bet細胞中,BFV3026病毒及該病毒感染性克隆的復制均受到了一定程度的抑制,該結果進一步驗證了Bet具有負調控的作用。
本文同時構建了缺失BTas的感染性克隆pBS-BFV-△
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