冷脅迫下鐵皮石斛抗寒相關基因的克隆與表達研究.pdf

1、鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是傳統名貴珍稀中藥材，具有益胃生津、滋陰清熱等獨特功效。因過度采挖、生存環(huán)境破壞，野生鐵皮石斛資源基本枯竭。21世紀以來，鐵皮石斛人工栽培取得了突破性進展，而其抗寒性是制約人工栽培特別是原生態(tài)栽培的主要瓶頸。研究鐵皮石斛抗寒的分子機制是抗寒品種選育的基礎，本文進行了冷脅迫下鐵皮石斛抗寒相關基因的克隆與表達研究，取得了如下研究結果：
　　 ⑴通過冷

2、脅迫下葉片相對電導率的測定和葉片保護酶的活性大小判定5個家系鐵皮石斛的抗寒能力，結果表明:通過葉片保護酶確定的鐵皮石斛的抗寒能力與葉片相對電導率計算出的半致死溫度確定的抗寒順序一致，順序為:E＞D＞C＞B＞A。
　　 ⑵綜合常用的RNA提取方法，建立并優(yōu)化了CTAB+LiCl+RNAiso Plus鐵皮石斛RNA提取方法，獲得了能夠滿足后續(xù)分子實驗要求的鐵皮石斛RNA，并為其他多糖類中藥材的總RNA提取提供了有益的借鑒和參考。<

3、br>　　 ⑶通過鐵皮石斛進行冷脅迫下SCoT差異顯示研究，獲得11個差異表達片段，分別與膜相關蛋白、滲透調節(jié)蛋白、轉錄因子、抗逆性蛋白有很高的同源性，還有兩個基因片段功能未知，可能與鐵皮石斛的抗寒有關。
　　 ⑷利用其他物種中Actin基因的保守序列設計簡并引物，采用RACE技術從鐵皮石斛中成功克隆到了Actin的全長cDNA序列。鐵皮石斛Actin與其它植物的Actin基因無論是其核苷酸序列還是編碼的氨基酸序列都具有高度的