抗豬傳染性胃腸炎病毒M蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、本實驗用IPTG誘導含有豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)重組M基因質粒的大腸桿菌，表達重組TGEVM蛋白。并以純化的M蛋白為抗原，免疫BALB/c小鼠，按常規(guī)方法進行融合，間接ELISA方法進行篩選，采用有限稀釋法，經(jīng)過三次克隆，最終獲得三株抗重組TGEVM蛋白的雜交瘤細胞系(命名為1B3、3C2、4A5)，分泌的單克隆抗體分別為IgG2a、IgGl、IgGl類，三株雜交瘤細胞在體外長期培養(yǎng)和長期凍存時都穩(wěn)定地分泌單克隆抗體。三株雜交瘤細

2、胞的平均染色體數(shù)為85-95，間接ELISA檢測1B3、3C2、4A5細胞培養(yǎng)上清的效價分別為1：4000、1：1000、1：4000，腹水效價分別為1：5×105、1：5×106、1：5×106。通過間接ELISA做病原檢測，分別與TGEV、PEDV、PRV和PrV反應，結果顯示，這三株單抗與TGEV顯示良好的特異性，而與PEDV、PRV和PrV不存在交叉反應。說明獲得的單抗具有高度的特異性，可用于TGEV的診斷。 用實驗獲得

3、的單克隆抗體和SP2/0細胞培養(yǎng)上清對感染TGEV的IBRS2細胞培養(yǎng)物進行了間接免疫熒光檢測病原的比較研究：間接免疫熒光染色后，與單抗作用的細胞培養(yǎng)物中，多數(shù)細胞在其胞漿和細胞膜上出現(xiàn)黃綠色閃亮熒光，且熒光強度強，與SP2/0細胞培養(yǎng)上清作用的細胞培養(yǎng)物未見有黃綠色閃亮熒光，結果表明，利用所制備的抗TGEV重組M蛋白的單克隆抗體進行間接免疫熒光對病原檢測具有較高的特異性。 所有的實驗結果表明，所制備的抗重組TGEVM蛋白的單抗